[发明专利]转基因成分nos终止子基因恒温检测引物、检测试剂盒及检测方法

权利要求书

1.转基因成分nos终止子的恒温检测引物组，包括外引物1和外引物2、内引物1和内引物2、环引物和探针引物，其核苷酸序列分别如下所示：

外引物1：5’- ATGATTAGAGTCCCGCAATT -3’；

外引物2：5’- CTCTTCGCTATTACGCCAG -3’；

内引物1：5’- CTCACTATAGGGCGAATTGGGTTAGCGCGCAAACTAGGATA -3’；

内引物2：5’- GCTCACTGGCCGTCGTTTTGCTGCAAGGCGATTAAG -3’；

环引物：5’- CAACGTCGTGACTGGGAA -3’；

探针引物：FAM- ACTGACCTCGACAGATGACACCGTCAGT -BHQ-1。

2.一种转基因成分nos终止子的恒温检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的恒温检测引物组。

3.根据权利要求2所述的转基因成分nos终止子的恒温检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还包括：DNA聚合酶、LAMP反应液、阳性对照和阴性对照。

4.根据权利要求3所述的转基因成分nos终止子的恒温检测试剂盒，其特征在于，所述LAMP反应液包括10mM dNTP、150mM MgSO₄水溶液，二者的体积比是7～9：2～4。

5.根据权利要求3所述的转基因成分nos终止子的恒温检测试剂盒，其特征在于，所述阳性对照为转基因成分nos终止子的DNA或含目的基因的大肠杆菌质粒DNA，阴性对照为不含目的基因的反应混合液。

6.一种转基因成分nos终止子的检测方法，包括如下步骤及特征：

（1）提取待检样品DNA；

（2）恒温基因扩增反应：利用权利要求1所述的恒温检测引物组对待检样品进行恒温扩增，扩增时将检测管放置在可提供恒温及荧光检测的仪器上，每30～60s采集一次荧光信号；

（3）结果判断：根据有无“S”型扩增曲线判断阴阳性结果，有“S”型扩增曲线为阳性结果，反之为阴性结果。

7.根据权利要求6所述的转基因成分nos终止子的检测方法，其特征在于，所述恒温基因扩增反应体系的25μl反应体系含有：内引物1 0.2μM，内引物2 0.2μM，外引物1 1.6μM，外引物2 1.6μM，环引物0.8μM，探针引物0.8μM，LAMP反应液12.5μl，DNA聚合酶8U，待检样品DNA 2μl ，用超纯水补齐到25μl。

8.根据权利要求6所述的转基因成分nos终止子的检测方法，其特征在于，所述恒温基因扩增反应的程序为：60～63℃反应20～60min。