[发明专利]一种三七分子身份证及鉴定方法

说明书

技术领域

本发明属于中药材来源品种鉴定技术领域，具体涉及一种三七分子身份证及鉴定方法。

背景技术

三七(Panax notoginseng)是人参属多年生植物，是我国传统名贵中药材，距今已有400多年的应用历史，在国内外久负盛名，三七自古就有“止血神药”的美称。具有散瘀止血，消肿定痛之功效。主治咯血，吐血，衄血，便血，崩漏，外伤出血，胸腹刺痛，跌仆肿痛。由于三七独特的止血功效，其需求量巨大，云南白药集团、天津天士力、广州白云山等企业都是三七的大用户。年需要量已经接近8000吨，用量仍处于上升趋势。由于三七药材价格昂贵，市场上常出现其混伪品。三七与人参、西洋参、竹节参及其变种狭叶竹节参、珠子参和疙瘩七以及姜状三七、屏边三七和假人参均作为药物使用，由于三七与其近缘种外形类似，传统的性状鉴别对三七与其近缘种的鉴定有一定困难，尤其对于药材市场存在的三七花、粉末的鉴别具有更大障碍。

现有的对三七的传统鉴别方法，在实际运用中要进行准确鉴别难度极大，且存在主观性大，通用性差，且对观察者经验要求高等缺陷。而分子鉴别手段比较准确可靠，但目前尚无统一的标准化方法。

因此有必要开发一种结果准确且鉴定过程简便快速的三七鉴定方法。

发明内容

本发明的目的在于克服传统鉴别技术中存在的上述缺陷，提供一种结果准确灵敏，鉴定过程简便快速的三七鉴定方法。

为达到以上目的，本发明的发明人在对大量的样品的筛选过程中，寻找出能够将正品三七与混伪品进行精确区分的正品三七的特异分子身份证序列，并提供了对三七鉴别较为快速，简便，廉价的方法。

本发明提供了一种三七分子身份证，所述分子身份证中含有如SEQ ID No.1和/或SEQ ID No.2所示的核苷酸序列。

可选的，所述分子身份证为SEQ ID No.1和/或SEQ ID No.2所示的核苷酸序列。

在本发明的一种实施方式中，所述分子身份证为SEQ ID No.1所示的序列。

在本发明的另一种实施方式中，所述分子身份证为SEQ ID No.2所示的序列。

本发明提供了一种三七的鉴定方法，其中，所述方法包括检测样品基因组DNA中是否存在本发明所述的分子身份证。

所述方法包括如下步骤：

1)以待测样品基因组DNA为模板，对所述分子身份证进行PCR扩增，获得扩增产物；

2)对扩增产物进行测序，拼接后去除引物区获得扩增片段，检测扩增片段中是否存在所述分子身份证。

当存在SEQ ID No.1和/或SEQ ID No.2所示的片段时可以判定被测样品中存在三七成分或为三七。相反，如果既不存在SEQ IDNo.1所示的片段也不存在SEQ ID No.2所示的片段时，判定被测样品为伪品。

本发明对于PCR所使用的引物无特别的限制，只要能够对所述分子身份证进行扩增即可，为了获得最佳的鉴定效果，所述PCR扩增使用的引物为：

ITS2F 5′-ATGCGATACTTGGTGTGAAT-3′(SEQ ID No.3所示的核苷酸序列)，

ITS3R 5′-GACGCTTCTCCAGACTACAAT-3′(SEQ ID No.4所示的核苷酸序列)。

可选的，所述PCR扩增的反应程序为：

可选的，所述PCR扩增的反应体系为：

PCR Buffer(10×)2.5μL，Mg²⁺2μL(25mmol/L)，dNTPs混合物2μL(2.5mmol/L)，引物各1.0μL(2.5μmol/L)，模板DNA 1μL(-约30ng)，Taq DNA聚合酶1.0U，加灭菌双蒸水至25μL，进行PCR扩增。

其中，所述待测样品包括三七及同属近缘种及伪混品。

所述待测样品的形式可以为植株、药材、种子、种苗和花，利用本发明所提供的方法可以对因加工而难以通过形态学鉴定进行区分的检测对象进行准确的鉴别，例如可以对粉末形式的样品进行鉴定。

本发明提供了所述方法或所述的分子身份证在鉴定三七中的应用。

利用本发明所提供的分子身份证和方法可以准确的将三七与形态特征相似的伪品区分开，本发明所提供的方法适用性更广，能检测所有能提取出DNA的三七任何样品。因此，能够实现三七原植物、药材、种子、种苗、花、粉末和混淆品的快速、准确鉴定。

附图说明