[发明专利]灯盏细辛破壁饮片的指纹图谱共有模式构建及其质量检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及中药饮片的质量检测方法，尤其是灯盏细辛破壁饮片的指纹图谱共有模式构建及其质量检测方法。

背景技术

本品为菊科植物短葶飞蓬Erigeronbreviscapus(Vant.)Hand.-Mazz.的干燥全草。灯盏细辛的主要活性成分为黄酮类和咖啡酰类，主要包括野黄芩素、芹菜素、芹菜素-O-7-β-D-葡萄糖醛酸、野黄芩苷、1,5-二咖啡酰奎宁酸和3,4-二咖啡酰奎宁酸等。2010版药典以野黄芩苷为对照品，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇0.1％磷酸溶液(40：60)为流动相；检测波长335nm，理论板数按野黄芩苷峰计算应不低于5000的色谱条件，照《高效液相色谱法检验标准操作程序》测定对其进行质量控制。

中药破壁饮片是利用现代超微粉碎技术将传统饮片进行破细胞壁粉碎成粒度分布D90小于45μm的微细颗粒，再制成30～100目的颗粒。相对于传统饮片具有色泽一致，质量均一，稳定性好的特点,为创新型中药饮片。由于中药破壁饮片不具传统中药饮片的形态特征，破壁后会带来有效成分或指标成分等化学成分的溶出度变化，使传统饮片的鉴别、质量检测方法不能完全适用。因此，必须针对中药破壁饮片建立专属性强，全面反映中药破壁饮片质量状况的检测方法。而建立一项新的质量检测方法并非易事，例如检测条件、对照品的选择和供试品的制备方法等均需要研究考量并进行验证。虽然现有技术中有涉及中药指纹图谱的检测方法，但并无针对形态特殊的中药破壁饮片的方法，且存在专属性、稳定性、重现性和精密度差缺陷，不能完全反应饮片的质量情况的缺陷。

发明内容

本发明提供了一种灯盏细辛破壁饮片的指纹图谱共有模式构建方法及其质量检测方法。

其中，所述的指纹图谱共有模式构建方法包括以下步骤：

(1)供试品溶液的制备:取灯盏细辛破壁饮片约0.250g，加入70％甲醇50ml，浸润30min,水浴加热回流提取2h，用0.22um微孔滤膜过滤，滤液备用；

(2)对照品配制：取灯盏乙素对照品适量，加70％甲醇配制成0.1mg/ml的对照品溶液；

(3)色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；以甲醇为流动相A，以0.3％甲酸溶液为流动相B；梯度洗脱：0min-20min-50min，流动相A变化：35％-45％-75％；柱温为35℃；检测波长为335nm；流速：0.6mL/min；注入量：供试品溶液10μl，对照品5ul；

(4)按上述供试品溶液及对照品的制备方法及色谱条件对10批以上的灯盏细辛破壁饮片样品进行HPLC分析，得到相应指纹图谱；以灯盏乙素峰为参照峰，计算各指纹图谱中主要色谱峰的相对保留时间及相对峰面积；输入指纹图谱分析软件，对各批次样品指纹图谱进行相似度比较，以平均谱图为共有模式，计算相似度，建立灯盏细辛破壁饮片指纹图谱共有模式标准图谱，包括13个特征峰。

所述的质量检测方法包括以下步骤：

(1)按上述的构建方法中步骤(1)和步骤(2)分别制备待测样品供试品溶液和对照品溶液，按步骤(3)的色谱条件，精密吸取待测样品供试品溶液10μl，对照品5ul，注入HPLC色谱仪，测定，记录色谱，即得。

(2)合格指标的建立及指定图谱、判断方法：供试品色谱中，应呈现13个与灯盏细辛破壁饮片HPLC指纹图谱共有模式标准图谱相对应的特征峰；按中药色谱指纹图谱相似度评价系统计算，供试品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度不得低于0.90，以灯盏乙素峰为对照峰，其余12个共有特征峰相对保留时间分别为：0.363、0.450、0.512、0.838、0.942、1.113、1.163、1.267、1.543、1.658、1.757、1.983，各峰相对保留时间RSD≤±5％，为合格。

本发明是首次针对灯盏细辛破壁饮片质量控制所构建的HPLC指纹图谱共有模式标准图谱及质量检测方法。该方法克服了现有技术不能完全适用灯盏细辛破壁饮片质量控制的缺陷。该图谱较全面涵盖了灯盏细辛破壁饮片主要活性成分的图谱信息，专属性明显优于现有的同类指纹图谱方法。经试验验证该方法的稳定性、重现性和精密度均达到法定要求，且操作简单，检测快速准确；并能有效控制灯盏细辛药材、破壁粉体、破壁饮片整体质量及鉴别伪品。

附图说明

图1是对照品峰的指认中灯盏细辛破壁饮片与灯盏乙素对照品的比较图谱。

图2是灯盏细辛破壁饮片指纹图谱专属性考察比较图谱。