[发明专利]瘦素在诱导胚胎干细胞分化为造血干/祖细胞中的用途及其应用

权利要求书

1.一种用于诱导胚胎干细胞分化为造血干/祖细胞的试剂盒，其特征在于，包括：

第一培养基，所述第一培养基为添加了瘦素的AdvancedRPMI 1640培养基；以及

第二培养基，所述第二培养基为添加了瘦素的Stempro 34培养基，

第三培养基，所述第三培养基为添加了1-硫代甘油、维生素C磷酸酯、谷氨酰胺的Advanced RPMI 1640培养基，

第四培养基，所述第四培养基为添加了1-硫代甘油、维生素C磷酸酯、谷氨酰胺、重组激活素A、重组人骨形成蛋白4、重组人碱性成纤维生长因子和CHIR99021的Advanced RPMI1640培养基，

其中，所述第一培养基中、第二培养基中的瘦素的浓度为10-300ng/ml，

所述第一培养基进一步添加了1-硫代甘油、维生素C磷酸酯、谷氨酰胺、重组人骨形成蛋白4、重组人碱性成纤维生长因子和重组人血管内皮生长因子，

所述第一培养基中，所述1-硫代甘油的浓度为4×10^-4M；所述维生素C磷酸酯的浓度为50μg/ml；所述谷氨酰胺的浓度为2mM；所述重组人骨形成蛋白4的浓度为20ng/ml；所述重组人碱性成纤维生长因子的浓度为20ng/ml；以及所述重组人血管内皮生长因子的浓度为50ng/ml；

所述第二培养基进一步添加了1-硫代甘油、维生素C磷酸酯、谷氨酰胺、重组人干细胞因子、重组人白介素3、人FMS样酪氨酸激酶3配体和CHIR99021；

所述第二培养基中，所述1-硫代甘油的浓度为4×10^-4M；所述维生素C磷酸酯的浓度为50μg/ml；所述谷氨酰胺的浓度为2mM；所述重组人干细胞因子的浓度为50ng/ml；所述重组人白介素3的浓度为50ng/ml；所述人FMS样酪氨酸激酶3配体的浓度为50ng/ml；以及所述CHIR99021的浓度为3μM；

所述第三培养基和第四培养基中，所述1-硫代甘油的浓度为4×10^-4M；所述维生素C磷酸酯的浓度为50μg/ml；所述谷氨酰胺的浓度为2mM；所述重组激活素A的浓度为25ng/ml；所述重组人骨形成蛋白4的浓度为25ng/ml；所述重组人碱性成纤维生长因子的浓度为25ng/ml；以及所述CHIR99021的浓度为3μM，

其中，所述胚胎干细胞均来自商业化的永生化细胞株。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述第一培养基中、第二培养基中的瘦素的浓度为50-150ng/ml。

3.一种利用权利要求1或2所述的试剂盒制备造血干/祖细胞的方法，其特征在于，包括：

利用所述第一培养基对预处理的胚胎干细胞进行培养，以便得到生血内皮细胞；和

利用所述第二培养基对所述生血内皮细胞进行培养，以便获得造血干/祖细胞，

其中，所述预处理包括：

利用所述第三培养基对胚胎干细胞进行培养，以便得到失去部分全能性的胚胎干细胞；和

利用所述第四培养基对所述失去部分全能性的胚胎干细胞进行培养，以便得到中胚层祖细胞，

其中，所述胚胎干细胞均来自商业化的永生化细胞株。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，利用所述第一培养基对所述预处理的胚胎干细胞培养84～108小时，

利用所述第二培养基对所述生血内皮细胞培养84～108小时，

利用所述第三培养基对胚胎干细胞培养12～26小时，

利用所述第四培养基对所述失去部分全能性的胚胎干细胞培养36～60小时。