[发明专利]一种用于处理生活垃圾的复合微生物除臭剂及其制备方法

权利要求书

1.一种用于处理生活垃圾的复合微生物除臭剂，其特征在于由以下重量份的原料混合制备而成：

复合光合细菌菌粉20-30份，枯草芽孢杆菌菌粉10-20份，复合曲霉菌粉20-40份，复合酵母菌粉30-50份；

制备方法包括以下步骤：

步骤(1)、复合光合细菌菌粉的制备

采用紫硫光合细菌中的桃红荚硫菌菌种与紫色非硫光合细菌中的深红红螺菌按以下步骤进行培养：

A、桃红荚硫菌半固体种子活化培养：将桃红荚硫菌种穿刺在半固体桃红荚硫菌培养基中，25-30℃光照培养7-10天，待穿刺的菌线变红并长出菌苔，即可作为活化的桃红荚硫菌种；

B、深红红螺菌平板活化：将深红红螺菌菌种在平板上划线活化，温度25-35℃活化培养3-5天，挑取大个菌落作为活化种子；

C、桃红荚硫菌种子培养：将活化的桃红荚硫菌种接种至桃红荚硫菌种子液体培养基中，温度25-35℃，光照强度为：1000-3000lux，光照厌氧培养7-10天，检测种子的OD650≥1.2，活菌数≥6亿cfu/ml即为桃红荚硫菌种子培养液；

D、深红红螺菌种子培养：将挑取大个深红红螺菌菌落作为活化种子接种到种子培养基中，温度25-35℃，光照强度为：1000-3000lux，光照静置培养3-5天，检测种子的OD660≥1.2，活菌数≥8亿cfu/ml即为深红红螺菌种子培养液；

E、发酵培养：将桃红荚硫菌种子培养液与发酵培养基以1：3-1：5的接种量接种，同时将深红红螺菌种子培养液与发酵培养基按1：10-1：15的接种量接入，在光照培养罐中厌氧培养，培养温度25-35℃，光照强度为：1000-4000lux，搅拌速度为120转/分钟，待培养至第三天，开始流加100g/L的硫代硫酸钠溶液至发酵培养液中，在24小时内将发酵培养液中的硫代硫酸钠的浓度调至1-3g/L，继续培养3-5天，待检测其OD650≥5，活菌数≥40亿cfu/ml，其中桃红荚硫菌不低于20亿cfu/ml，即可放罐，用沸石粉吸附，调节菌浓度为20亿cfu/g，30-40℃风干，即得复合光合细菌菌粉；

其中，所述的半固体桃红荚硫菌培养基为：氯化铵0.4-1.2g/L，磷酸二氢钾0.5-1g/L，二水氯化钙0.05-0.2g/L，氯化镁0.1-0.5g/L，苹果酸钠2-10g/L,果糖1-3g/L，九水硫化钠0.1-1g/L，琼脂8-10g/L，氯化钠0.5-4g/L，121℃灭菌15分钟，用苹果酸调pH至7.0-7.2,其中九水硫化钠先配制成0.1g/mL单独灭菌；

其中，所述的桃红荚硫菌种子液体培养基为：氯化铵0.4-1.2g/L，磷酸二氢钾0.5-1g/L，二水氯化钙0.05-0.2g/L，氯化镁0.1-0.5g/L，苹果酸钠2-10g/L,果糖1-3g/L，硫代硫酸钠0.5-3g/L，氯化钠0.5-4g/L，121℃灭菌15分钟；

其中，所述的深红红螺菌种子液体培养基为:氯化铵0.8-1.2g/L，磷酸二氢钾0.5-1g/L，二水氯化钙0.05-0.2g/L，氯化镁0.1-0.5g/L，苹果酸钠2-10g/L,果糖1-3g/L，氯化钠1-2g/L,酵母膏0.2-1g/L,121℃灭菌15分钟，用灭菌苹果酸调pH至7.0-7.2；

其中，所述的深红红螺菌平板固体培养基为种子液体培养基加入20g/L的琼脂形成的；

其中，所述的发酵培养基：氯化铵0.8-1.2g/L，磷酸二氢钾0.5-1g/L，二水氯化钙0.05-0.2g/L，氯化镁0.1-0.5g/L，苹果酸钠1-5g/L，果糖4-10g/L，酵母膏0.2-1g/L，氯化钠0.5-2g/L，121℃灭菌15分钟，用苹果酸调PH至6.8-7.0；

所述的桃红荚硫菌种保藏在中国普通微生物菌种中心，保藏编号为CGMCC10344；

所述的深红红螺菌购于广东省微生物菌种中心，编号为GIM1.482；

步骤(2)、枯草芽孢杆菌菌粉的制备

取出菌种保藏管，用营养肉汁固体培养基划平板进行复苏，37℃培养48小时，在平板下挑取单个菌落接种50毫升营养肉汁培养基中，在培养箱中37℃震荡培养24小时，种子采用5％的接种量，接种至5L大三角瓶中，装液量为2L，营养肉汁培养基，37℃震荡培养20-28小时，检测其菌液浓度，活菌含量超过20亿cfu/ml，即可作为枯草芽孢杆菌液体菌种接种至装有600L发酵培养基的1000L发酵罐中，接种量为5％，开搅拌120r/min，前10小时通气量为300L/min，10小时后通气量为480L/min，37℃培养16-24小时，待芽孢含量不低于250亿cfu/ml，即可结束发酵，板框过滤除水，剩下菌体加轻质碳酸钙，调节菌体浓为200亿cfu/g，干燥后即得到枯草芽孢杆菌菌粉；

其中，所述营养肉汁培养基：蛋白胨5g，牛肉膏3g，氯化钠5g，水1000mL，pH7.2，固体培养基中加入琼脂2％；

其中，所述芽孢杆菌液体发酵培养基：葡萄糖8g/L，玉米粉20g/L，鱼粉10g/L，硫酸镁0.2g/L，硫酸锰0.1g/L，磷酸二氢钾0.5g/L，磷酸氢二钠2.0g/L，pH7.0，各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟；

步骤(3)、复合曲霉菌粉的制备

采用米根霉菌与米曲霉按以下步骤进行培养：

A、米根霉菌种子液的制备：取出米根霉菌菌种保藏管，用PDA固体培养基划平板进行复苏，30℃培养4天，在平板下挑取单个菌落划线接种装有150毫升PDA固体培养基的茄子瓶中，在培养箱中30℃培养4-6天，待菌苔长满茄子瓶，产生大量孢子即可用500毫升的无菌生理盐水洗脱，调节孢子浓度为0.4亿cfu/ml，即为米根霉菌种子液；

B、米曲霉种子液的制备：取出米曲霉菌种保藏管，用PDA固体培养基划平板进行复苏，30℃培养5天，在平板下挑取单个菌落划线接种装有150毫升PDA固体培养基的茄子瓶中，在培养箱中30℃培养5-7天，待菌苔长满茄子瓶，产生大量孢子即可用500毫升的无菌生理盐水洗脱，调节孢子浓度为1亿cfu/ml，即为米曲霉种子液；

C、混合发酵：将上述制备的米根霉菌种子液与米曲霉种子液以1：1的比例混合均匀后，以1％的接种量接种至灭菌的曲霉固体发酵培养基上，菌种与固体培养基混合均匀后，将接好种的固体发酵培养基摊在发酵槽上，物料高度为10-20cm，控温28-32℃，湿度保持为60％-75％，发酵4-6天，检测其总孢子含量不低于10亿/g，米根霉菌孢子含量不低于4亿/g，即可低温风干，即得到复合曲霉菌粉；

其中，所述的PDA固体培养基：土豆200g，蔗糖20g，水1000mL，琼脂20g；

其中，所述的固体发酵培养基：麸皮75％，棉粕5％，玉米芯8％，玉米粉1％，石粉1％，粗玉米皮10％，尿素0.4％，磷酸氢二钾0.4％，硫酸镁0.05％，料水比1:0.8，各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟；

步骤(4)、复合酵母菌粉的制备

采用酿酒酵母与季也蒙假丝酵母菌按以下步骤进行培养：

A、酿酒酵母种子液的制备：取出酿酒酵母菌种保藏管，用PDA固体培养基划平板进行复苏，30℃培养48小时，在平板下挑取单个菌落接种150毫升PDA培养基中，在培养箱中30℃震荡培养24小时，种子采用5％的接种量，接种至2L PDA液体培养基中，30℃震荡培养20-28小时，检测其菌液浓度，活菌含量超过10亿cfu/ml，即可作为酿酒酵母菌种子液体；

B、季也蒙假丝酵母菌种子液的制备：取出季也蒙假丝酵母菌菌种保藏管，用季也蒙假丝酵母固体培养基划平板进行复苏，30℃培养48小时，在平板下挑取单个菌落接种150毫升季也蒙假丝酵母培养基中，在培养箱中30℃震荡培养24小时；种子采用5％的接种量，接种至3L的季也蒙假丝酵母培养基，30℃震荡培养20-28小时，检测其菌液浓度，活菌含量超过6亿cfu/ml，即可作为季也蒙假丝酵母菌种子液；

C、混合发酵培养：将上述制备的酿酒酵母菌种子液体与季也蒙假丝酵母菌种子液按2：3的比例混合均匀后作为混合酵母种子，以5％的接种量接种至700L的酵母菌发酵培养基中，开搅拌120r/min，通气量350L/min，30℃培养20-28小时，待酵母菌总含量不低于40亿cfu/ml，季也蒙假丝酵母菌含量不低于15亿cfu/ml，即可结束发酵，板框过滤除水，剩下菌体加轻质碳酸钙，调节菌浓为40亿cfu/g，干燥即得到复合酵母菌粉；

其中，所述的PDA培养基：土豆200g，蔗糖20g，水1000mL，固体培养基中加入琼脂2％；

其中，所述的季也蒙假丝酵母培养基：蔗糖10g，酵母膏0.4g，磷酸氢二钾0.5g，碳酸钙1g，七水硫酸镁0.2g，氯化铁0.005g，水1000mlpH 7.0-7.2，固体培养基中加琼脂20g；

其中，所述的酵母菌发酵培养基：糖蜜100g/L，玉米粉10g/L，豆粕10g/L，酵母膏0.3g/L，蛋白胨0.5g/L，硫酸铵0.5g/L，硫酸镁0.1g/L；各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟；

所述的季也蒙假丝酵母菌种购自中国农业微生物菌种中心，编号为：ACCC20232；

步骤(5)、混合粉碎

按复合光合细菌菌粉20-30份，枯草芽孢杆菌菌粉10-20份，复合曲霉菌粉20-40份，复合酵母菌粉30-50份的重量比，混合均匀，粉碎过100目筛，即得到复合微生物除臭剂。

2.如权利要求1所述的用于处理生活垃圾的复合微生物除臭剂，其特征在于所述的除臭的环境是生活垃圾收集站、生活垃圾填埋场和/或生活垃圾处理场。