[发明专利]壁虎蛆虫蛋白质在制备抗黑色素瘤药品中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种壁虎蛆虫蛋白质的新用途，尤其是壁虎蛆虫蛋白质在制备抗黑色素瘤药品中的应用。

背景技术

恶性黑素瘤是由皮肤和其它器官黑素细胞产生的肿瘤，皮肤黑素瘤表现为色素性皮损在数月或数年中发生明显改变。

由于黑色素细胞起源于神经嵴，广泛分布于皮肤、眼、黏膜表面和神经系统等，因此，恶性黑色素瘤可以在皮肤、口腔、消化道、生殖系统的黏膜、眼球的睫状体、虹膜、脉络膜以及脑膜等处发生。

恶性黑色素瘤大多是由良好黑色素痣转化而来。环境因素、遗传因素、严重的化学、光损害及药物侵蚀都可以引发生成恶性黑色素瘤。

治疗方案一般采用外科手术治疗、放疗、化疗、内分泌治疗、生物治疗、生物化学治疗，中医则将病症分为风湿热毒、外郁肌肤型，肝郁气虚、瘀毒凝滞型，肝肾阴虚、肌肤失养型三种类型，对症治疗。

CN103417953A公开了重组灵芝免疫调剂蛋白（rLZ-8）在制备治疗黑色素瘤药物中的应用。该发明采用原位瘤和转移瘤实验动物模型研究重组灵芝免疫调节蛋白的抗肿瘤作用。

CN102067828A公开了人黑色素瘤高转移模型、细胞亚系以及建立方法和转移的动态检测。该发明采用肺转移灶在小鼠肺转移用体内筛选的方法建立了皮下移植模型及相应的细胞亚系。

CN103952367A公开了一种发酵培养基及利用其生产黑色素瘤治疗性质粒DNA疫苗pSVK-CAVA的方法。该发明描述了发酵培养基的组成，并描述了其生产方法。

CN102805859A公开了作为体内造血刺激剂的TAT-HOXB4H重组蛋白质及其医疗组成物。本发明涉及一种C-端含有组氨酸标记的HOXB4H重组蛋白质的制备方法，该重组蛋白质应用于增加骨髓内以及周边血液内的造血干细胞的数量。

CN102847144A公开了一种提高机体免疫功能的细胞类生物药物及其制备方法和应用。该发明表述了以免疫细胞与特定抗原在培养基中培养并获得相应抗原的特异性免疫细胞培养物，然后后处理分离出具有免疫应答的细胞，用于治疗和预防肿瘤及病毒性疾病。

CN102924578A公开了抗肿瘤多肽及其制备方法和抗肿瘤应用。该发明提供了一种具有抗肿瘤功能的多肽的制备方法，该多肽包括内皮抑素N端锌离子结合位点的3个组氨酸结构，一个β折叠结构及串联的RGD系列。

发明内容

本发明的目的是提供一种壁虎蛆虫蛋白质在制备抗黑色素瘤药品中的应用，根据黑色素瘤的病灶特性及壁虎蛆虫蛋白质生物活性特点，两者相结合制备的药剂具有适应性强、疗效好的特点。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

（1）将1000g壁虎蛆虫在常温膨化装置（200520108339.X）中常温条件下膨化粉碎。

本步骤中，所述膨化压力为0.1~5MPa，时间为10~60min。

（2）膨化粉碎后的物料加入到膨胀溶剂体系提取装置（201210179076.6）中，加入膨胀溶剂并加压至2~10MPa，形成膨胀溶剂体系，提取出壁虎蛆虫蛋白质粗品。

本步骤中，所述膨胀溶剂由1~10Kg液态二氧化碳、100~500mL甲醇及100~300gNH₃·H₂O组成或由1~10Kg液态二氧化碳、100~500mL乙醇及100~300g氯化铵组成。

本步骤中，所述提取温度为10~20℃，时间为10~30min。

（3）收集含有壁虎蛆虫蛋白质粗品的溶液并且用微孔过滤器过滤去掉杂质。

本步骤中，所述微孔过滤器的孔径为0.5~50μm。

（4）用超滤机超滤处理，收集含有相应分子量的壁虎蛆虫蛋白质超滤溶液。

本步骤中，所述超滤机的孔径为50~100nm。

（5）超滤液溶解在适宜的溶剂中用固相萃取柱分离，收集洗脱成分。

本步骤中，所述溶剂为乙腈。

（6）将洗脱成分溶解在合适的溶剂体系中，用超声驻波液相制备色谱（200920274485.8）分离纯化。

本步骤中，所述溶剂体系由正丁醇-乙酸乙酯-水（体积比1.25:3.75:5）组成或4.5%聚乙二醇-7%葡聚糖T500（重量比）组成。

（7）纯化后的壁虎蛆虫蛋白质用真空冷冻干燥机制备成冻干蛋白粉。

本步骤中，所述真空冷冻干燥温度为-30~50℃、时间为18~26h。

（8）赋予不同的药用辅助材料，可用于制备抗黑色素瘤药品。