[发明专利]壁虎蛆虫蛋白质在制备抗淋巴癌药品中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种壁虎蛆虫蛋白质的新用途，尤其是壁虎蛆虫蛋白质在制备抗淋巴癌药品中的应用。

背景技术

恶性淋巴癌是原发于淋巴结或淋巴结外组织或器官的恶性肿瘤，根据临床病理特点可以划分为霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤。一般认为恶性淋巴瘤起源于淋巴细胞及其前体细胞，病毒和细菌感染、免疫缺陷、环境致癌物、电离辐射和遗传等都可能是恶性淋巴瘤的病因。

现在的治疗方法采用化疗、靶向治疗、造血干细胞移植、干扰素等。

CN103667466A公开了一种用于B细胞非霍奇金淋巴瘤及其耐药性检测的标志物。该标志物为采用实时定量PCR的扩增产物，可以通过标志物检测其表达水平与疾病进展之间的相关性。

CN101757558A公开了一种治疗恶性淋巴肿瘤的中草药制剂及其制备方法。该药剂由藿香、红花、山豆根、三棱、莪术、猫布草、桃仁、白花、蛇舌草、川乌、草乌、蜈蚣、全虫等19种中草药组成制备成散剂、煎剂、丸剂，用于治疗淋巴肿瘤。

CN101007158公开了一种治疗恶性肿瘤的中药组合物，该组合物是由灵脂、没药、乳香、三棱、莪术、蒲公英、藿香、紫河车、水蛭、蟾蜍、壁虎、双花、皂刺、连翘、大青叶等组成。

CN102861236A公开了一种纯中药抗肿瘤制剂，该制剂是由黄精、灵芝、三七、桃仁、葛根、牡蛎、石耳、枸杞子、半枝莲、白花蛇舌草等13种中草药组成。

201210315707.2公开了人工培殖壁虎蛆虫的工艺，该发明以壁虎等为原料，配制成适宜的培养基，培殖出药用壁虎蛆虫，该虫体具有较高生物活性，可以抗淋巴癌。

发明内容

本发明的目的是提供一种壁虎蛆虫蛋白质在制备抗淋巴癌药品中的应用，根据淋巴癌的病灶特性及壁虎蛆虫蛋白质生物活性特点，两者相结合制备的药剂具有适应性强、疗效好的特点。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

（1）将1000g壁虎蛆虫在常温膨化装置（200520108339.X）中常温条件下膨化粉碎。

本步骤中，所述膨化压力为0.1~5MPa，时间为10~60min。

（2）膨化粉碎后的物料加入到膨胀溶剂体系提取装置（201210179076.6）中，加入膨胀溶剂并加压至2~10MPa，形成膨胀溶剂体系，提取出壁虎蛆虫蛋白质粗品。

本步骤中，所述膨胀溶剂由1~10Kg液态二氧化碳、100~500mL甲醇及100~300gNH₃·H₂O组成或由1~10Kg液态二氧化碳、100~500mL乙醇及100~300g氯化铵组成。

本步骤中，所述提取温度为10~20℃，时间为10~30min。

（3）收集含有壁虎蛆虫蛋白质粗品的溶液并且用微孔过滤器过滤去掉杂质。

本步骤中，所述微孔过滤器的孔径为0.5~50μm。

（4）用超滤机超滤处理，收集含有相应分子量的壁虎蛆虫蛋白质超滤溶液。

本步骤中，所述超滤机的孔径为50~100nm。

（5）超滤液溶解在适宜的溶剂中用固相萃取柱分离，收集洗脱成分。

本步骤中，所述溶剂为乙腈。

（6）将洗脱成分溶解在合适的溶剂体系中，用超声驻波液相制备色谱（200920274485.8）分离纯化。

本步骤中，所述溶剂体系由正丁醇-乙酸乙酯-水（体积比1.25:3.75:5）组成或4.5%聚乙二醇-7%葡聚糖T500（重量比）组成。

（7）纯化后的壁虎蛆虫蛋白质用真空冷冻干燥机制备成冻干蛋白粉。

本步骤中，所述真空冷冻干燥温度为-30~50℃、时间为18~26h。

（8）赋予不同的药用辅助材料，可用于制备抗淋巴癌药品。

本技术方案中分离的纯化壁虎蛆虫蛋白质经聚丙烯酰胺凝胶电泳、双向聚丙烯酰胺凝胶电泳及琼脂聚糖免疫电泳谱上测得非均一蛋白质；用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法及葡聚糖凝胶G-75凝胶过滤法测得相对分子量为10.9~12.6KPa；用等电聚焦发测定其等电点为pH8.8~10.2；常规化学法分析结果表明其不含糖基；紫外分光光度法测定纯化的壁虎蛆虫蛋白质含量为96.7%。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明的技术方案作进一步的说明，但并不局限如此，凡是对本发明技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，均应涵盖在本发明的保护范围中。

实施例1：