[发明专利]一种用于肝细胞良、恶性肿瘤辅助诊断的双染试剂盒及其应用在审
| 申请号： | 201510085335.2 | 申请日： | 2015-02-15 |
| 公开（公告）号： | CN104730242A | 公开（公告）日： | 2015-06-24 |
| 发明（设计）人： | 杨鉴;李玉;闫有臣;张海明 | 申请（专利权）人： | 广州安必平医药科技股份有限公司 |
| 主分类号： | G01N33/574 | 分类号： | G01N33/574 |
| 代理公司： | 广州市越秀区哲力专利商标事务所(普通合伙) 44288 | 代理人： | 齐文剑 |
| 地址： | 510665 广东省广州市广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 用于 肝细胞 恶性肿瘤 辅助 诊断 试剂盒 及其 应用 | ||
1.一种用于肝细胞良、恶性肿瘤辅助诊断的双染试剂盒，其特征在于，包括混合一抗，所述混合一抗为Arginase-1与Glypian-3的混合抗体。
2.根据权利要求1所述的双染试剂盒，其特征在于，所述混合一抗中Arginase-1与Glypian-3在混合一抗中的滴度分别为90-110和90-110。
3.根据权利要求1所述的双染试剂盒，其特征在于，该双染试剂盒还包括混合二抗，所述混合二抗为碱性磷酸酶标记羊抗兔二抗与辣根过氧化物酶标记羊抗鼠二抗的混合抗体。
4.根据权利要求1所述的双染试剂盒，其特征在于，该双染试剂盒还包括显色试剂AP-Red和DAB，以及TBS缓冲液。
5.一种如权利要求1所述的双染试剂盒在辅助鉴别诊断肝细胞良、恶性肿瘤中的应用。
6.一种非诊断性鉴别肝细胞良、恶性肿瘤的检测方法，其特征在于，使用如权利要求1所述的双染试剂盒，其检测方法包括以下步骤：
(1)脱蜡和水化：脱蜡前将组织切片放在烤片机上烘烤，然后依次置于二甲苯、无水乙醇、95％乙醇和蒸馏水中浸泡；
(2)抗原修复：将步骤(1)中组织切片放在EDTA抗原修复液中煮沸修复，冷却，自来水冲洗，蒸馏水浸泡；
(3)封闭：在步骤(2)中组织切片中加入3％过氧化氢，室温孵育，用蒸馏水冲洗，TBS缓冲液清洗并浸泡；
(4)双染：在步骤(3)中组织切片滴加混合一抗，经室温孵育后，TBS缓冲液清洗，滴加混合二抗，经室温孵育，TBS缓冲液清洗，加入显色剂DAB和AP-Red显色；
(5)复染：将步骤(4)中组织切片放入苏木素溶液中复染，TBS缓冲液返蓝；
(6)脱水：将步骤(5)中组织切片置于95％乙醇、无水乙醇依次浸泡；
(7)透明：将步骤(6)中组织切片置于二甲苯中浸泡；
(8)封片。
7.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，还包括对步骤(1)中组织切片的前处理步骤，该组织切片用10％中性福尔马林固定，组织切片厚度为2-5μm。
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