[发明专利]一种用于宫颈上皮内瘤变分级辅助诊断的双染试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种用于宫颈上皮内瘤变分级辅助诊断的双染试剂盒，其特征在于，该双染试剂盒包括免疫组化标记物一抗，该免疫组化标记物一抗为Stathmin抗体与MCM2抗体组成的混合抗体试剂。

2.根据权利要求1所述的双染试剂盒，其特征在于，所述Stathmin抗体与MCM2抗体的滴度均为90-120。

3.根据权利要求1所述的双染试剂盒，其特征在于，该双染试剂盒还包括AP标记羊抗鼠二抗和HRP标记羊抗兔二抗的混合二抗。

4.根据权利要求1所述的双染试剂盒，其特征在于，该双染试剂盒还包括显色剂，所述显色剂为AP-Red染色液和DAB染色液。

5.如权利要求1-4任一项所述的双染试剂盒在宫颈上皮内瘤变分级辅助诊断中的应用。

6.一种宫颈上皮内瘤变分级非诊断性的辅助鉴定方法，其特征在于，该辅助鉴定方法采用如权利要求1-4任一项所述的双染试剂盒，并包括以下步骤：

1)脱蜡和水化：福尔马林固定-石蜡包埋的正常宫颈上皮组织，脱蜡前将正常宫颈上皮组织切片放在烤片机上烤片，然后依次经过二甲苯中浸泡、无水乙醇浸泡、95％乙醇中浸泡、蒸馏水中浸泡；

2)抗原修复：切片在EDTA抗原修复液中煮沸修复，冷却，自来水冲洗，蒸馏水浸泡；

3)封闭：用过氧化氢室温孵育，蒸馏水冲洗，TBS清洗并浸泡；

4)双染：滴加Stathmin蛋白与MCM2蛋白的混合抗体，室温孵育后TBS清洗，然后滴加混合二抗，孵育后TBS清洗，再分别DAB显色，AP-Red显色，终止反应；

5)复染1-3分钟，TBS返蓝；

6)脱水：依次95％乙醇中浸泡、无水乙醇中浸泡；

7)透明：二甲苯中浸泡；

8)封片。

7.根据权利要求6所述的辅助鉴定方法，其特征在于，步骤1)中二甲苯中浸泡2次，每次10分钟；无水乙醇浸泡2次，每次5分钟、95％乙醇中浸泡5分钟、蒸馏水中浸泡1分钟。

8.根据权利要求6所述的辅助鉴定方法，其特征在于，步骤2)中EDTA抗原修复液的pH值为8.8-9.2。

9.根据权利要求8所述的辅助鉴定方法，其特征在于，步骤5)中复染的染料为苏木素。