[发明专利]防止表没食子儿茶素和没食子酸被转化的方法

说明书

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，特别涉及一种防止表没食子儿茶素和没食子酸被转化的方法。

背景技术

茶饮料作为一种全球流行的植物饮料，其在抗癌和心血管等疾病的保健功效已经得到公认。儿茶素是茶鲜叶中最主要的多酚类功能性物质，其含量占鲜叶干重的12～24％，多酚总量的70～80％。茶叶中的儿茶素主要由儿茶素(C)，没食子儿茶素(GC)，表儿茶素(EC)，表没食子儿茶素(EGC)，表儿茶素没食子酸酯(ECG)和表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)组成。其中又以表没食子儿茶素没食子酸脂(EGCG)含量最高，占儿茶素总量的50～60％。近年来大量研究证实，茶多酚具有消除自由基、抗氧化等生物活性，在抑菌、抗病毒、抑制肿瘤、防治心血管疾病等方面具有良好功效。

事实上，喝茶后，茶多酚在消化道上段不能被分解利用，同时也很少被吸收。绝大多数茶多酚(超过90％)进入到结肠，被结肠微生物所分解后再被结肠吸收，然后进入系统循环起作用，一部分则被排出体外。因此，如何提高茶多酚的生物可利用度近年来已成为业界关注的热点。2011年，J.A.Macedo et al利用Paecilomycesvariotii单宁酶生物转化绿茶、巴拉圭茶提取物以及绿原酸和EGCG标品。研究发现，采用丹宁酶转化茶多酚和EGCG后其抗氧化活性和抗癌活性均有明显的增强。这就说明茶多酚通过生物转化可以显著提高其生物利用度和生物活性。茶多酚体外转化是将在结肠中微生物的消化分解转移到体外进行，相当于延长的动物消化道，可大大提高茶多酚的生物可利用度。

茶多酚体外转化可选择酶转化的方式，而降解茶多酚的水解酶通常由霉菌产生。四川大学直接利用其实验室筛选得到的黑曲霉降解茶多酚中儿茶素聚合体为儿茶素单体。当蔗糖的添加量为30g/L，茶多酚浓度为8g/L，发酵60h，儿茶素产率达到最大值，为26.69％；随着茶多酚浓度继续升高，儿茶素产率呈下降趋势。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中存在的缺点与不足，提供一种防止表没食子儿茶素和没食子酸被转化的方法。

本发明的目的通过下述技术方案实现：一种防止表没食子儿茶素和没食子酸被转化的方法，采用黑曲霉(Aspergillusniger)RAF106菌株进行全细胞生物转化，全细胞生物转化的营养液中加入质量份数2～10份糖用以阻止表没食子儿茶素和没食子酸被进一步转化。

所述的黑曲霉(Aspergillusniger)RAF106菌株，保藏日期为2014年8月27日，保藏编号为CGMCC NO.9608，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)；保藏单位地址为中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号(100101)。

所述的黑曲霉(Aspergillusniger)RAF106菌株具有以下生物学特性：菌落表面平坦，边缘整齐，培养基背面呈乳白色，中间稍有乳黄色，基内菌丝发达。在25℃的察氏平板培养基上培养8d，RAF106菌落直径为51.0±1.53mm，边缘有少量白色绒毛状气生菌丝，菌落表面呈灰褐色，表面有小滴状黑色渗透液(见图2)。菌落形态不规则，表面褶皱状，培养基背面呈黑褐色。

黑曲霉RAF106菌株rDNA-ITS全长碱基序列如SEQ ID NO：1所示。

所述的黑曲霉(Aspergillusniger)RAF106菌株应用种子培养基进行种子培养，获得黑曲霉RAF106菌株的种子分生孢子；

所述的种子培养基的配方为：马铃薯200g，蔗糖20g，琼脂20g，蒸馏水1000mL，pH自然，121℃灭菌20min。黑曲霉RAF106菌株的种子培养基也可使用市售的马铃薯蔗糖琼脂(PDA)培养基。

所述的种子培养的条件为：茄子瓶静置培养，培养温度28～35℃，培养时间3～5d。

在所述的种子培养过程中，黑曲霉RAF106菌株的种子菌接种量为每毫升全细胞生物转化的营养液接种10²～10⁸个黑曲霉RAF106菌株分生孢子。

所述的黑曲霉RAF106菌株的种子分生孢子的获取方法为：采用无菌生理盐水冲洗长满黑色黑曲霉分生孢子的茄子瓶，并以接种环轻轻刮取种子培养基表面，得到黑曲霉分生孢子悬浮液。

所述的全细胞生物转化为液态转化。