[发明专利]一种假交替单胞菌发酵生产卡拉胶酶的培养基及发酵方法

权利要求书

1.一种食鹿角菜假交替单胞菌ASY5发酵生产卡拉胶酶的培养基，其特征在于：包括菌种活化培养基、种子培养基及发酵培养基；

所述菌种活化培养基为：牛肉膏 10 g/L，胰蛋白胨 10 g/L ，琼脂 20 g/L，NaCl 21.1 g/L ，KCl 0.58 g/L ，CaCl₂ 0.811 g/L ，MgCl₂·6H₂O 3.6 g/L ，NaHCO₃ 0.083 g/L ，MgSO₄·7H₂O 2.625 g/L ，调pH到7.3，121℃灭菌20 min；

所述种子培养基为：牛肉膏 10 g/L，胰蛋白胨 10 g/L ，NaCl 21.1 g/L ，KCl 0.58 g/L ，CaCl₂ 0.811 g/L ，MgCl₂·6H₂O 3.6 g/L ，NaHCO₃ 0.083 g/L ，MgSO₄·7H₂O 2.625 g/L ，调pH到7.3，121℃灭菌20 min；

所述发酵培养基为：卡拉胶 2.5 g/L ，胰蛋白胨 3.0 g/L ，NaCl 30.0 g/L ，KCl 0.1 g/L ，MgSO₄·7H₂O 3.0 g/L ，FeSO₄·7H₂O 0.0366 g/L ，Na₂HPO₄·12H₂O 3.78 g/L ，NaH₂PO₄·2H₂O1.3 g/L ，CaCl₂ 0.2 g/L ，121℃灭菌20 min。

2.一种如权利要求1所述的食鹿角菜假交替单胞菌ASY5生产卡拉胶酶的发酵方法，其特征在于：包括以下步骤：

种子的活化与制备：将上述食鹿角菜假交替单胞菌ASY5菌种接至菌种活化培养基中，20℃培养24 h，再接至装有种子培养基的摇瓶中，20℃培养24 h，获得摇瓶种子液；

摇瓶发酵：摇瓶种子液接种至装有适用于食鹿角菜假交替单胞菌ASY5产卡拉胶酶发酵培养基的摇瓶之中，20℃培养72 h，获得含有卡拉胶酶的发酵液；

罐上发酵：摇瓶种子液接种至装有发酵培养基的7 L发酵罐中，20℃培养72 h，获得含有卡拉胶酶的发酵液；

中试放大发酵：摇瓶种子液接种至装有发酵培养基的20 L的发酵罐中，20℃培养72 h，获得含有卡拉胶酶的发酵液；或者摇瓶种子液接种至装有种子培养基的7L发酵罐中，20℃培养24h，获得发酵罐种子液，再将发酵罐种子液接种至装有发酵培养基的200 L发酵罐中，20℃培养72h，获得含有卡拉胶酶的发酵液。

3.如权利要求2所述的食鹿角菜假交替单胞菌ASY5生产卡拉胶酶的发酵方法，其特征在于：所述种子的活化与制备步骤，将-20℃保藏的甘油管菌种解冻后接于装有菌种活化培养基的平板，20℃培养24 h，获得活化的食鹿角菜假交替单胞菌ASY5菌种；然后从平板上挑取培养好的菌种于装有40 mL种子培养基的250 mL摇瓶中，20℃，180 r/min发酵24 h，获得摇瓶种子液。

4.如权利要求2所述的食鹿角菜假交替单胞菌ASY5生产卡拉胶酶的发酵方法，其特征在于：所述摇瓶发酵，将培养好的摇瓶种子液以2%的接种量接入装有50 mL发酵培养基的250 mL摇瓶中，20℃，180 r/min发酵72 h。

5.如权利要求2所述的食鹿角菜假交替单胞菌ASY5生产卡拉胶酶的发酵方法，其特征在于：所述罐上发酵，将培养好的摇瓶种子液按照2%的接种量接入装有5 L发酵培养基的7 L发酵罐中，20℃，400 r/min发酵72 h。

6.如权利要求2所述的食鹿角菜假交替单胞菌ASY5生产卡拉胶酶的发酵方法，其特征在于：所述中试放大发酵，将培养好的种子按照2%的接种量接入装有10 L发酵培养基的20 L罐中，20℃，150 r/min发酵72 h。