[发明专利]鉴定或辅助鉴定香蕉枯萎病菌的成套引物及应用

权利要求书

1.鉴定或辅助鉴定香蕉枯萎病菌的成套引物，其特征在于：所述成套引物由名称为A的PCR引物对、名称为B的PCR引物对和名称为C的PCR引物对组成；

所述A由序列表中SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示的两条单链DNA组成；所述B由序列表中SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示的两条单链DNA组成；所述C由序列表中SEQ ID No.5和SEQ ID No.6所示的两条单链DNA组成。

2.鉴定或辅助鉴定香蕉枯萎病菌的成套引物，其特征在于：所述成套引物由权利要求1所述A和权利要求1所述C组成。

3.鉴定或辅助鉴定香蕉枯萎病菌的成套引物，其特征在于：所述成套引物由权利要求1所述B和权利要求1所述C组成。

4.鉴定或辅助鉴定香蕉枯萎病菌的PCR引物对，其特征在于：所述PCR引物对为权利要求1所述C。

5.鉴定或辅助鉴定香蕉枯萎病菌的系统，其特征在于：所述系统为下述Hh-Kk中的任一种：

Hh、含有权利要求1所述成套引物的系统；

Ii、含有权利要求2所述成套引物的系统；

Jj、含有权利要求3所述成套引物的系统；

Kk、含有权利要求4所述C的系统。

6.根据权利要求5所述的系统，其特征在于：所述系统还包括DNA聚合酶。

7.鉴定或辅助鉴定香蕉枯萎病菌的方法，为下述H、I、J和K中的任一种：

H下述H1)或H2)：

H1)下述H11)和H12)：

H11)以待测生物样品的核酸为模板，用权利要求1所述A进行PCR扩增得到PCR产物A1；以所述待测生物样品的RNA或以RNA为模板转录得到的cDNA为模板，用权利要求1所述B进行PCR扩增得到PCR产物B1；以所述待测生物样品的核酸为模板，用权利要求1所述C进行PCR扩增得到PCR产物C1；

H12)检测H11)所述PCR产物A1、所述PCR产物B1和所述PCR产物C1的大小，如果所述PCR产物B1中含有500bp-750bp的DNA片段，所述PCR产物A1中含有500bp-750bp的DNA片段，所述PCR产物C1中含有500bp-750bp的DNA片段，所述待测样品含有或候选含有尖孢镰刀菌古巴专化型亚热带4号生理小种；如果所述PCR产物B1中含有500bp-750bp的DNA片段，所述PCR产物A1中含有500bp-750bp的DNA片段，所述PCR产物C1中不含500bp-750bp的DNA片段，所述待测样品含有或候选含有尖孢镰刀菌古巴专化型4号生理小种，所述尖孢镰刀菌古巴专化型4号生理小种不为尖孢镰刀菌古巴专化型亚热带4号生理小种；如果所述PCR产物B1中含有500bp-750bp的DNA片段，所述PCR产物A1中不含500bp-750bp的DNA片段，所述待测样品含有或候选含有尖孢镰刀菌古巴专化型，所述尖孢镰刀菌古巴专化型不为尖孢镰刀菌古巴专化型4号生理小种；如果所述PCR产物B1中不含500bp-750bp的DNA片段，所述待测样品不含或候选不含尖孢镰刀菌古巴专化型；

H2)下述H21)和H22)：

H21)以待测生物样品的核酸为模板，用权利要求1所述A进行PCR扩增得到PCR产物A2；以所述待测生物样品的DNA为模板，用权利要求1所述B进行PCR扩增得到PCR产物B2；以所述待测生物样品的核酸为模板，用权利要求1所述C进行PCR扩增得到PCR产物C2；

H22)检测H21)所述PCR产物A2、所述PCR产物B2和所述PCR产物C2的大小，如果所述PCR产物B2中含有500bp-750bp的DNA片段，所述PCR产物A2中含有500bp-750bp的DNA片段，所述PCR产物C2中含有500bp-750bp的DNA片段，所述待测样品含有或候选含有尖孢镰刀菌古巴专化型亚热带4号生理小种；如果所述PCR产物B2中含有500bp-750bp的DNA片段，所述PCR产物A2中含有500bp-750bp的DNA片段，所述PCR产物C2中不含500bp-750bp的DNA片段，所述待测样品含有或候选含有尖孢镰刀菌古巴专化型4号生理小种，所述尖孢镰刀菌古巴专化型4号生理小种不为尖孢镰刀菌古巴专化型亚热带4号生理小种；如果所述PCR产物B2中含有500bp-750bp的DNA片段，所述PCR产物A2中不含500bp-750bp的DNA片段，所述待测样品含有或候选含有尖孢镰刀菌古巴专化型，所述尖孢镰刀菌古巴专化型不为尖孢镰刀菌古巴专化型4号生理小种；如果所述PCR产物B2中不含500bp-750bp的DNA片段，所述待测样品不含或候选不含尖孢镰刀菌古巴专化型；

I下述I1)和I2)：

I1)以待测生物样品的核酸为模板，用权利要求1所述A进行PCR扩增得到PCR产物A1；以所述待测生物样品的核酸为模板，用权利要求1所述C进行PCR扩增得到PCR产物C1；

I2)检测I1)所述PCR产物A1和所述PCR产物C1的大小，如果所述PCR产物A1中含有500bp-750bp的DNA片段，所述PCR产物C1中含有500bp-750bp的DNA片段，所述待测样品含有或候选含有尖孢镰刀菌古巴专化型亚热带4号生理小种；如果所述PCR产物A1中含有500bp-750bp的DNA片段，所述PCR产物C1中不含500bp-750bp的DNA片段，所述待测样品含有或候选含有尖孢镰刀菌古巴专化型4号生理小种，所述尖孢镰刀菌古巴专化型4号生理小种不为尖孢镰刀菌古巴专化型亚热带4号生理小种；如果所述PCR产物A1中不含500bp-750bp的DNA片段，所述待测样品不含或候选不含尖孢镰刀菌古巴专化型4号生理小种；

J下述J1)或J2)或J3)或J4)：

J1)下述J11)和J12)：

J11)以待测生物样品的RNA或以RNA为模板转录得到的cDNA为模板，用权利要求1所述B进行PCR扩增得到PCR产物B1；以所述待测生物样品的核酸为模板，用权利要求1所述C进行PCR扩增得到PCR产物C1；

J12)检测J11)所述PCR产物B1和所述PCR产物C1的大小，如果所述PCR产物B1中含有500bp-750bp的DNA片段，所述PCR产物C1中含有500bp-750bp的DNA片段，所述待测样品含有或候选含有尖孢镰刀菌古巴专化型亚热带4号生理小种；如果所述PCR产物B1中含有500bp-750bp的DNA片段，所述PCR产物C1中不含500bp-750bp的DNA片段，所述待测样品含有或候选含有尖孢镰刀菌古巴专化型，所述尖孢镰刀菌古巴专化型不为尖孢镰刀菌古巴专化型亚热带4号生理小种；如果所述PCR产物B1中不含500bp-750bp的DNA片段，所述待测样品不含或候选不含尖孢镰刀菌古巴专化型；

J2)下述J21)和J22)：

J21)以待测生物样品的DNA为模板，用权利要求1所述B进行PCR扩增得到PCR产物B2；以所述待测生物样品的核酸为模板，用权利要求1所述C进行PCR扩增得到PCR产物C2；

J22)检测J21)所述PCR产物B2和所述PCR产物C2的大小，如果所述PCR产物B2中含有500bp-750bp的DNA片段，所述PCR产物C2中含有500bp-750bp的DNA片段，所述待测样品含有或候选含有尖孢镰刀菌古巴专化型亚热带4号生理小种；如果所述PCR产物B2中含有500bp-750bp的DNA片段，所述PCR产物C2中不含500bp-750bp的DNA片段，所述待测样品含有或候选含有尖孢镰刀菌古巴专化型，所述尖孢镰刀菌古巴专化型不为尖孢镰刀菌古巴专化型亚热带4号生理小种；如果所述PCR产物B2中不含500bp-750bp的DNA片段，所述待测样品不含或候选不含尖孢镰刀菌古巴专化型；

J3)下述J31)和J32)：

J31)在同一个PCR反应体系中，以待测生物样品的RNA或以RNA为模板转录得到的cDNA为模板，用权利要求3所述成套引物进行PCR扩增得到PCR产物；

J32)检测J31)所述PCR产物的大小，如果所述PCR产物中含有两条500bp-750bp的DNA片段，所述待测样品含有或候选含有尖孢镰刀菌古巴专化型亚热带4号生理小种；如果所述PCR产物中仅含有一条500bp-750bp的DNA片段，所述待测样品含有或候选含有尖孢镰刀菌古巴专化型，所述尖孢镰刀菌古巴专化型不为尖孢镰刀菌古巴专化型亚热带4号生理小种；如果所述PCR产物中不含500bp-750bp的DNA片段，所述待测样品不含或候选不含尖孢镰刀菌古巴专化型；

J4)下述J41)和J42)：

J41)在同一个PCR反应体系中，以待测生物样品的DNA为模板，用权利要求3所述成套引物进行PCR扩增得到PCR产物；

J42)检测J41)所述PCR产物的大小，如果所述PCR产物中含有两条500bp-750bp的DNA片段，所述待测样品含有或候选含有尖孢镰刀菌古巴专化型亚热带4号生理小种；如果所述PCR产物中仅含有一条500bp-750bp的DNA片段，所述待测样品含有或候选含有尖孢镰刀菌古巴专化型，所述尖孢镰刀菌古巴专化型不为尖孢镰刀菌古巴专化型亚热带4号生理小种；如果所述PCR产物中不含500bp-750bp的DNA片段，所述待测样品不含或候选不含尖孢镰刀菌古巴专化型；

K下述K1)和K2)：

K1)以所述待测生物样品的核酸为模板，用权利要求1所述C进行PCR扩增得到PCR产物C1；

K2)检测K1)所述PCR产物C1的大小，如果所述PCR产物C1中含有500bp-750bp的DNA片段，所述待测样品含有或候选含有尖孢镰刀菌古巴专化型亚热带4号生理小种；如果所述PCR产物C1中不含500bp-750bp的DNA片段，所述待测样品不含或候选不含尖孢镰刀菌古巴专化型亚热带4号生理小种。