[发明专利]一种病毒特异性靶标及其制备细胞免疫治疗制剂的应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及病毒特异性靶标及其应用。

背景技术

病毒由一个核酸分子(DNA或RNA)与蛋白质构成或仅由蛋白质构成(如朊病毒)。病毒个体微小，结构简单。病毒没有细胞结构，由于没有实现新陈代谢所必需的基本系统，病毒自身不能复制。但是当它接触到宿主细胞时，便脱去蛋白质外套，它的核酸侵入宿主细胞内，借助后者的复制系统，按照病毒基因的指令复制新的病毒。

病毒感染后，由于病毒没有自我繁殖的能力，它必须借助人体细胞(即靶细胞)的生长而复制。也就是说，病毒感染后必须进入人体细胞才能生存、复制。人体感染病毒致病后，只能依靠体内免疫系统产生的免疫细胞来杀灭病毒。目前尚缺乏特效治疗，仍以全身支持疗法和对症治疗为主。用抗生素或磺胺治疗无效，一些抗病毒药物如碘脱氧尿嘧啶核苷、阿糖腺苷、无环鸟苷对疱疹病毒感染等有一定疗效。

细胞免疫治疗是一种新兴的、具有显著疗效的治疗模式，是一种基于自身免疫的新型治疗方法，其运用生物技术和生物制剂对从病人体内采集的免疫细胞进行体外培养和扩增后回输到病人体内的方法，来激发/增强机体自身免疫功能，从而达到治疗的目的。

细胞疗法的具体方法是通过科技手段将病人体内的单个核细胞提取出来，用特殊方法在患者体外将其培养成为树突状细胞(DC)，赋予其专杀病毒的抗原信息，再使其数量成千万倍增多，成为专门攻击杀伤病毒的“细胞导弹”。这种特殊的“导弹”能精确“瞄准”病毒进行杀伤，却不会伤及正常的肝细胞。然后将这种负载抗原信息的DC细胞回输到患者体内，在患者体内形成大量针对病毒的免疫杀伤细胞(CTL)，从而针对病毒产生主动性和靶向性攻击，迅速准确地杀灭病毒(包括变异病毒)，使患者在短时间内康复。

目前临床应用的细胞免疫治疗技术基本停留在LAK、NK、CIK、DC(临床肿瘤活检组织或肿瘤细胞系提取物)水平，而由腺病毒转染负载抗原和CAR-T技术由于应用了基因技术，在伦理等方面存在争论。

发明内容

本发明的目的是提供一种病毒特异性靶标及其在制备细胞治疗制剂的应用。

本发明提供的病毒特异性的靶标，其氨基酸序列为FCWEWASAK，如SEQ ID No 1所示。

作为优选，所述病毒为乙型肝炎病毒。

本发明还提供所述靶标在制备治疗乙型肝炎病毒相关疾病的制剂中的应用，更优选地，所述治疗为细胞免疫治疗。

本发明的另一个目的是提供一种用于细胞免疫治疗体外诱导的制剂，包含所述的靶标。

作为优选，其为细胞培养液。更优选地，其为树突状细胞的细胞培养液。

本发明由于使用了高特异性病毒靶标，使树突状细胞在体外可以附载靶标并扩增，经流式细胞仪检测靶标附载量与树突状细胞扩增数量成正相关。

十余年来，发明人通过大量工作获得病毒高特异性靶标，所述靶标可实现树突状细胞体外的有效扩增和活化，所递呈的T淋巴细胞对该病毒具有特异的杀伤作用，是目前最符合细胞免疫学原理的细胞免疫治疗技术，具有良好的应用前景。

附图说明

图1为流式细胞仪检测图。

具体实施方式

本发明公开了一种病毒特异性靶标及其应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的产品及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面结合具体实施例对本发明作进一步的详细说明。

实施例1：

1、标本采集

要求患者血象处于正常值范围之内(WBC：4-10×10⁹、LYM％：20％-40％)，上下浮动不超过5％，机采外周血方式循环量1000-4000ml，单个核细胞数：多于1×10⁹。抽血方式50-100ml，单个核细胞数：多于1×10⁶。

抗凝剂要求首选肝素，枸橼酸钠次之，禁用EDTA。

2、操作前准备

将装有PBMC悬液的采集袋，用喷有75％酒精自上而下擦拭一遍，再放入传入传递窗，万级层流室中的制备人员从传递窗中取出再用喷有75％酒精的无尘布自上而下擦拭一遍，然后将其放入到处于运行状态的生物安全柜中。

3、分离单个核细胞