[发明专利]一种制备胎盘造血干细胞制剂的方法

权利要求书

1.一种制备胎盘造血干细胞制剂的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：

(1)用酶溶液消化胎盘组织，得到消化产物并去除所述消化产物中的组织残渣，得到酶解液；

(2)将所述酶解液与羟乙基淀粉溶液混合并使混合得到的物料分层，得到上层的有核细胞悬液；

(3)将所述有核细胞悬液与冻存液混合；

其中，所述酶溶液含有200-300IU/mL的Ⅰ型胶原酶、30-50IU/mL的DNA酶I、1.5-3.5IU/mL的分散酶和600-800IU/mL的透明质酸酶；所述冻存液中含有35-50mL/L的二甲基亚砜、10-20g/L的羟乙基淀粉、50-100g/L的人血白蛋白、10-20g/L的右旋糖酐、5-5.5g/L的氯化钠、4.5-5g/L的葡萄糖酸钠、3.4-3.9g/L的醋酸钠、0.3-0.45g/L的氯化钾和0.2-0.4g/L的氯化镁。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述胎盘组织与所述酶溶液的重量比为1：0.5-5；所述酶解液与所述羟乙基淀粉溶液的体积比为1：0.1-0.5；所述有核细胞悬液与所述冻存液的体积比为1：6-10。

3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述羟乙基淀粉溶液含有10-90g/mL的羟乙基淀粉。

4.根据权利要求1所述的方法，其中，所述羟乙基淀粉的分子量为450000-700000，取代度为0.4-0.7；所述右旋糖酐的分子量为32000-42000。

5.根据权利要求1所述的方法，其中，所述酶溶液、所述羟乙基淀粉溶液和所述冻存液具有与血浆渗透压相等的渗透压。

6.根据权利要求1所述的方法，其中，用所述酶溶液消化所述胎盘组织的条件包括：温度为35-38℃，时间为20-40分钟。

7.根据权利要求1所述的方法，其中，通过过滤和/或瞬时离心去除所述消化产物中的组织残渣；其中，所述瞬时离心的条件包括：时间为30-60秒，速度为210-340×g。

8.根据权利要求1所述的方法，其中，通过静置10-30分钟和/或450-750×g的离心使混合得到的物料分层。