[发明专利]棉花热激转录因子基因GhHsf39的启动子及其应用

权利要求书

1.一种核苷酸pghhsf39，其特征在于，所述核苷酸的序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一种重组载体，其特征在于，包含权利要求1所述的核苷酸pghhsf39。

3.一种转化体，其特征在于，包含权利要求1所述的核苷酸pghhsf39。

4.一种如权利要求1所述的核苷酸pghhsf39作为启动子的用途。

5.如权利要求4所述的用途，其特征在于，所述用途具体为核苷酸pghhsf39在非生物逆境中进行基因表达调控的应用，所述应用包括如下步骤：

步骤一，将pghhsf39启动子连接目的基因编码序列并连入表达载体，得重组载体；

步骤二，将所述重组载体转化农杆菌，得农杆菌工程菌；

步骤三，将所述农杆菌工程菌转化目标植物，即可实现启动子pghhsf39在非生物逆境中对基因表达的调控。

6.如权利要求4所述的用途，其特征在于，所述用途具体为核苷酸pghhsf39作为启动子在植物育种中的用途。

7.一种制备如权利要求1所述核苷酸pghhsf39的方法，其特征在于，包括如下步骤：从棉花基因组中克隆热激转录因子基因GhHsf39的启动子区域并转化大肠杆菌，筛选阳性克隆进行DNA测序，用测序所得序列减去GhHsf39基因的序列，即得所述启动子pghhsf39的核酸序列；具体方法如下：

(1)PCR扩增目的片段

根据已经公布的雷蒙德棉热激转录因子GhHSF39基因启动子区的序列设计引物，扩增产物大小为1711bp；

GhHSF39-pro F(SEQ ID NO.2)：5’-TAAAAATAAAATTCGGTTCGAGTAAATG-3’

GhHSF39-pro R(SEQ ID NO.3)：5’-AGTCAAGAACGGCGGCGGACCAACCTCG-3’

提取陆地棉基因DNA，并稀释至100ng/μl作为模板，利用上述引物进行PCR扩增；

(2)目的片段的回收和构建中间载体

通过琼脂糖凝胶电泳回收目的DNA片段，采用快速琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒；

将回收的目的DNA片段与pMD19-T克隆载体连接；将上述连接产物转化大肠杆菌感受态细胞DH5α，均匀涂布到含有羧苄青霉素的LB培养基平板上，37℃倒置培养16-20小时；挑取平板上的菌落，摇菌培养，取菌液做模板进行PCR阳性鉴定；

(3)测序验证

经过鉴定的阳性克隆，送交菌液进行DNA测序，将所得序列减去属于GhHSF39基因的部分，得到启动子序列，其核酸序列如SEQ ID NO.1所示，命名为pghhsf39。