[发明专利]携带HSL基因的重组腺病毒在降血脂方面的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种生物技术，尤其涉及一种利用携带HSL基因的重组腺病毒进行降低血脂的应用，属于生物医疗技术领域。

背景技术

随着生活水平的提高，大量高脂、高热量食品被人们广泛食用，同时，随着生活节奏的加快，生活压力加大，运动量减少，人类身体状态每况愈下，三高人群逐年递增，并开始成为诱使人类死亡的主要原因。

在基因研究过程中，激素敏感性脂肪酶(hormone-sensitive lipase，HSL)是脂肪分解的一种限速酶，其能够水解甘油三酯(TG)、甘油二酯(PG)、胆固醇酯和其他脂质及水溶性底物，并产生游离脂肪酸。HSL主要存在于脂肪组织中，在胰腺、睾丸、肌肉、肾上腺等组织中也有少量表达。

随着基因工程的深入，探讨基因工程对降低血脂的影响和作用，确定出可行、有效的降血脂方法，就成为本发明的主要目的。

发明内容

鉴于上述现有情况，本发明旨在提供一种利用携带HSL基因的重组腺病毒进行降血脂的应用，以满足人类需要，改善血脂含量，促进身体健康。

本发明是通过以下技术方案来实现的：

一种携带HSL基因的重组腺病毒在降血脂方面的应用。

其中，HSL为人激素敏感性脂肪酶，其基因序列记载于Langin D，Laurell H，Holst LS，Belfrage P，Holm C.Gene organization and primary structure of human hormone-sensitive lipase：possible significance of a sequence homology with a lipase of Moraxella TA144，an Antarctic bacterium.Proc Natl Acad Sci U.S.A.1993June 1；90(11)：4897-901。

所述携带HSL基因的重组腺病毒采用细胞内质粒DNA同源重组法制备取得。具体步骤包括：将HSL基因克隆到穿梭质粒pXCJL1-CMV/pA的多克隆位点；然后与腺病毒载体GT4050通过脂质体共转染HEK293细胞，使其进行细胞内同源重组，通过HEK293细胞包装获得携带HSL基因的重组腺病毒Ad-HSL。对获得的重组腺病毒Ad-HSL进行扩增，采用CsCl密度梯度离心进行纯化和滴度测定，得到的产品在纯度和滴度方面均符合国家相关标准。

所述降血脂方面的应用包括降低血糖浓度、减轻体重和/或改善血脂代谢异常。

本发明所述的携带HSL基因的重组腺病毒在降血脂方面的应用，其通过对Ad-HSL在DIO小鼠或db/db小鼠模型的治疗得出：Ad-HSL可明显降低小鼠体重和血脂含量，改善血脂代谢异常现象。故证明，Ad-HSL在降血脂方面应有积极、有效、可靠的作用，为降低血脂、血糖提供了新的解决思路。

附图说明

图1治疗后小鼠体重变化曲线对照图；

图2治疗后小鼠血脂指标含量的对比直方图；

图3治疗后小鼠血糖浓度变化的对比直方图；

图4治疗小鼠经q-PCR检测后mRNA含量的对比直方图。

具体实施方式

为证明上述应用，下面结合附图1-4对本发明所述的携带HSL基因的重组腺病毒在降血脂方面的应用进行详细验证说明：

一、实验动物模型构建

1、Lepr^db db(db/db)小鼠模型构建

Lepr^db db小鼠，5-6周龄，雄性，普通饲料喂养，自由饮水，12h/12h黑白交替。每3天称量小鼠体重，每4天检测小鼠随机血糖，待平均体重至30g，随机血糖大于18mmol/L时开始治疗。

2、饮食诱导肥胖(Diet-Induced-Obese，DIO)小鼠模型构建

3-4周龄C57BL/6J雄性小鼠，普通饲料适应喂养1周后，按空腹体重随机选择8只小鼠设为正常对照组(Normal)，喂饲普通饲料，其余小鼠喂饲高脂饲料(60Kcal％脂肪，7Kcal％蔗糖)。每5天称量一次小鼠体重。喂养4周后，在高脂饲料喂养的小鼠中，选择体重高于对照组平均体重20％的个体，按体重平均分组。

二、动物模型的治疗