[发明专利]一种猪克隆胚胎的高效制备方法在审
| 申请号： | 201510067003.1 | 申请日： | 2015-02-06 |
| 公开（公告）号： | CN104651407A | 公开（公告）日： | 2015-05-27 |
| 发明（设计）人： | 吴珍芳;石俊松;罗绿花;周荣;纪红美;蔡更元;贺晓燕 | 申请（专利权）人： | 广东温氏食品集团股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/877 | 分类号： | C12N15/877 |
| 代理公司： | 广州番禺容大专利代理事务所(普通合伙) 44326 | 代理人： | 刘新年 |
| 地址： | 527400 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 种猪 克隆 胚胎 高效 制备 方法 | ||
1.一种猪克隆胚胎的高效制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)、在成熟的去核猪卵母细胞中注入供体细胞，在无钙融合液中，电刺激使供体细胞融合到去核卵母细胞内，培养1-1.5h；
(2)、挑出已融合的胚胎，放入钙离子浓度为0.1mmol/L的激活液内，电刺激激活胚胎，即得猪克隆胚胎。
2.根据权利要求1所述的猪克隆胚胎的高效制备方法，其特征在于，步骤(1)中融合后于38.5℃、5％二氧化碳、饱和湿度的培养箱内培养1.5h。
3.根据权利要求1或2所述的猪克隆胚胎的高效制备方法，其特征在于，所述供体细胞分离自公猪耳组织成纤维细胞。
4.根据权利要求1或2所述的猪克隆胚胎的高效制备方法，其特征在于，步骤(1)所述电刺激为2个60μs，1.7kv/cm的直流电脉冲。
5.根据权利要求1或2所述的猪克隆胚胎的高效制备方法，其特征在于，步骤(2)所述电刺激为2个80μs，1.6kv/cm的直流电脉冲。
6.根据权利要求1或2所述的猪克隆胚胎的高效制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述无钙融合液的配方为Manicol 0.25mol/L，MgCl2·6H2O0.1mmol/L，HEPES 0.5mmol/L，PVA 0.1g/L。
7.根据权利要求1或2所述的猪克隆胚胎的高效制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述激活液的配方为Manicol 0.25mol/L，CaCl2·2H2O 0.1mmol/L，MgCl2·6H2O 0.1mmol/L，HEPES 0.5mmol/L，PVA 0.1g/L。
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