[发明专利]工程菌及其在制备阿托伐他汀药物中间体中的应用

权利要求书

1.一种工程菌在以(S)-6-氯-5-羟基-3-羰基己酸叔丁酯为底物制备(R)-6-氰基-5-羟基-3-羰基己酸叔丁酯中的应用，其特征在于，所述工程菌包括宿主细胞和转入宿主细胞的目的基因，所述目的基因为碱基序列如SEQ ID NO.3所示的卤代醇脱卤酶基因。

2.一种工程菌在以(3R，5S)-6-氯-3,5-二羟基己酸叔丁酯为底物制备(3R，5R)-6-氰基-3,5-二羟基己酸叔丁酯中的应用，其特征在于，所述工程菌包括宿主细胞和转入宿主细胞的目的基因，所述目的基因为碱基序列如SEQ ID NO.3所示的卤代醇脱卤酶基因。

3.一种制备阿托伐他汀药物中间体的方法，其特征在于，包括：

(1)制备包含碱基序列如SEQ ID No.3所示的卤代醇脱卤酶基因的工程菌；

(2)制备所述工程菌的静息细胞悬液；

(3)将静息细胞悬液与底物、氰化物混合，反应制得产物；

所述底物为(S)-6-氯-5-羟基-3-羰基己酸叔丁酯，产物为(R)-6-氰基-5-羟基-3-羰基己酸叔丁酯；或者，所述底物为(3R，5S)-6-氯-3,5-二羟基己酸叔丁酯，产物为或(3R，5R)-6-氰基-3,5-二羟基己酸叔丁酯。

4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述反应的温度为18～40℃，反应液的pH值为7.0～9.0。

5.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述静息细胞悬液的制备方法包括：将所述工程菌活化后，扩大培养至OD₆₀₀达到0.6～1.2，加入诱导剂，继续培养，离心收集细胞，用缓冲液重悬，获得静息细胞悬液。

6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述诱导剂为IPTG；诱导剂的浓度为0.1～0.5mM。

7.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述缓冲液为HEPES缓冲液。

8.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述缓冲液在反应液中的浓度为1～100mM。

9.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述氰化物为NaCN。