[发明专利]拟黑多刺蚁中棕榈酸和油酸含量的测定方法

说明书

技术领域

 本发明涉及药用昆虫中特定成分含量的测定方法，特别是一种拟黑多刺蚁中棕榈酸和油酸含量的测定方法。

背景技术

拟黑多刺蚁(Poryrhaehis vicina Roger) 为药用昆虫拟黑多刺蚁的干燥虫体。收载于《中华本草》、《中药大辞典》等，产于广西，云南等地。其性平、微温、味咸酸、微腥。拟黑多刺蚁富含锌、硒、锰、铜、铁等量元素B1、B2、B6、A、E以及28种人体必须的氨基酸，具有补益肝肾、调理奇经、行气和血、消肿止痛、抗风湿、镇静、消炎、降脂、降糖、抗疲劳、解痛镇静、改善睡眠的功能及抑制肿瘤等药理作用，能改善全身营养状况，强身益寿。

研究表明，拟黑多刺蚁有降低痛风模型血清尿酸水平及抗炎作用，而拟黑多刺蚁脂溶性成分为其降低高尿酸血症模型小鼠血清尿酸水平的成分。拟黑多刺蚁中脂溶性成分中的主要成分为棕榈酸及油酸，棕榈酸和油酸均为长链脂肪酸，挥发性较差，若直接采用气相色谱法法对其进行含量测定，则有可能气化不完全，导致测量出现偏差。

目前，尚无拟黑多刺蚁中棕榈酸和油酸含量测定等方面的研究内容报道。为了促进拟黑多刺蚁的深入开发与利用，急需研发一种灵敏度高、重现性好的拟黑多刺蚁中棕榈酸和油酸含量的测定方法，为拟黑多刺蚁质量标准提供了研究基础。

发明内容

本发明的目的是提供一种操作简便，准确度高，重复性好的拟黑多刺蚁中棕榈酸和油酸含量的测定方法。

本发明是这样实现的：

一种拟黑多刺蚁中棕榈酸和油酸含量的测定方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）内标储备液的制备：

取正十八烷250mg，精密称定，置于100ml容量瓶中，加60～90℃石油醚溶解并稀释至100ml，即得内标储备液。

（2）对照品溶液的制备：

A）精密称取对照品棕榈酸甲酯100mg、油酸甲酯100mg，置于同一25ml容量瓶中，用60～90℃石油醚溶解并稀释至25ml，摇匀，即得对照品储备液。

B）精密量取对照品储备液2ml，置于25ml容量瓶中，用60～90℃石油醚溶解并稀释至25ml，摇匀，即得对照品溶液。

（3）供试品溶液的制备：

C）取拟黑多刺蚁样品适量，研碎，精密称取样品1g，置于100ml塞锥形瓶中，加入60～90℃石油醚10ml，摇匀，置于90℃水浴中回流60min，然后放置冷却。

D）用60～90℃石油醚补足水浴回流中减失的重量，然后滤过，取2ml滤液至容量为10ml具塞试管中，加入含有1mol/L氢氧化钾的甲醇溶液2ml，在50℃水浴中震荡加热15min，取出冷却，加入超纯水3ml，然后将滤液放入离心机进行离心，取上清液，即得供试品储备液；

E）精密量取内标储备液、供试品储备液各0.5ml置于同一5ml容量瓶中，加60～90℃石油醚稀释至5ml，摇匀，即得供试品溶液。

（4）用气相色谱仪、检测器及色谱检测软件配套使用，精密吸取1μL供试品溶液和对照品溶液分别注入气相色谱仪中，测定棕榈酸和油酸的色谱分析图，即得拟黑多刺蚁中棕榈酸和油酸的含量。

（5）设定色谱测定条件为：色谱柱为Rtx^R-5毛细管色谱柱，色谱柱规格为30m×0.32mm×0.25μm；柱温采用程序升温方式，以15oC/min的方式从80℃升温到220℃后保持5分钟；柱流量为2.0 ml/min；载气为高纯氦气；进样口温度230 °C；进样量1μL，分流比10:1。

F）线性关系的测定：精密吸取对照品储备液0.1、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0ml于10ml容量瓶中，加入内标储备液1.0ml，用石油醚稀释至10ml，摇匀；按步骤（5）的色谱条件下测定，以对照品与内标物的峰面积比（A_对照品 /A_内标）为纵坐标，以对照品与内标物浓度比（C_对照品/C_内标）为横坐标，绘制标准曲线；棕榈酸甲酯的回归方程为Y=0.9808X-0.1563 (γ=0.9994）；油酸甲酯的回归方程为Y=1.1033X＋0.1467（γ=0.9994）。结果显示，棕榈酸甲酯、油酸甲酯分别在0.0399~1.597μg、0.0394～1.576μg范围内线性良好。