[发明专利]一种预防猪传染性胃肠炎的疫苗

说明书

技术领域

本发明涉及基因工程领域，具体涉及一种预防猪传染性胃肠炎的疫苗。

背景技术

猪传染性胃肠炎(Transmissible Gastroenteritis,TGE)是由猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible Gastroenteritis virus,TGEV)引起猪的一种高度接触性肠道传染病，该病主要特征是引起发病猪呕吐、腹泻和脱水死亡，不同品种和年龄的猪对该病都易感，尤其是2周龄以内的小猪死亡率可高达100％。2010年以后，我国猪群大面积发生仔猪顽固型腹泻，其中TGEV是经常检测到的主要病原之一。

目前大多都是传统型灭活苗和弱毒苗，但是它存在毒力返强及散毒的风险，需要改进。为了研制出更为安全、高效、成本低廉、保存和使用方法简易的猪流行性腹泻疫苗，人们开始利用基因工程手段开发黏膜免疫疫苗，以期达到进一步预防和控制该病的目的。如，公开号为CN 103194471A的专利申请公开了包含猪传染性胃肠炎病毒S基因的片段和N基因的双基因乳酸菌疫苗，但是免疫原性不佳。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种新的疫苗。

本发明提供了包含SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示核苷酸序列的重组沙门氏菌在制备预防猪传染性胃肠炎的药物中的用途。

优选地，所述重组沙门氏菌包含携带有SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列的重组pVAX1质粒。

其中，所述药物包含致免疫有效量的重组沙门氏菌。

本发明疫苗它是由包含SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示核苷酸序列的重组沙门氏菌和药学上可接受的辅料或者载体制备而成。

优选地，所述重组沙门氏菌包含携带有SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列的重组pVAX1质粒。

优选地，所述的辅料或者载体为免疫佐剂和/或防腐剂。

优选地，所述佐剂为霍乱毒素、大肠杆菌不耐热肠毒素或大肠杆菌不耐热肠毒素B单位。

优选地，所述防腐剂为硫柳汞。

前述的疫苗在制备预防猪传染性胃肠炎的药物中的用途。

优选地，所述的预防猪传染性胃肠炎的药物是口服制剂，通过口服的方式给药。

在研究过程中，发明人根据经验，选择猪传染性胃肠炎病毒的S基因的特定基因片段，与N基因联合制备的双基因疫苗SL7207(pVAXD-N-Sa)，与含有N基因与全长S基因的重组沙门氏菌SL7207(pVAXD-N-Sa)相比，本发明重组沙门氏菌SL7207(pVAXD-N-Sa)的促外周血T细胞增殖促脾脏T细胞增殖更强，免疫产生的血清IgG、肠道粘膜IgA抗体、γ-干扰素更高，免疫产生的肠道粘膜IgG、IL-4则与前者相当，取得了意料不到的技术效果。

本发明采用基因工程的方式构建了同时含有S基因片段Sa与N基因的重组沙门氏菌SL7207(pVAXD-N-Sa)，由其制成的疫苗可以促进T细胞增殖，刺激机体产生猪传染性胃肠炎病毒特异性抗体以及γ-干扰素、IL-4等细胞因子，保护性强，并且稳定性强，安全性好，临床应用前景优良。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

附图说明

图1S基因PCR扩增。M:DNA Marker(100-6,000)；1:Sa基因的PCR扩增产物；

图2N基因PCR扩增。M:Wide Range DNA Marker(100-6,000)；1:N基因的PCR产物；

图3酶切和PCR鉴定pVAXD-Sa。M:DNA Marker(100-6,000)；1:从质粒pVAXD-Sa中扩增的Sa基因:2:pVAXD-Sa/NheI+HindIII酶切记过；

图4酶切和PCR鉴定pVAXD-N。M:DNA Marker(100-6,000)；1:从pVAXD-N中扩增的N基因:2:pVAXD-N/EcoRI+XhoI；

图5酶切和双重PCR鉴定pVAXD-N-Sa。M:DNA Marker(100-6,000)；1:从pVAXD-N-Sa中扩增的N和Sa结果；2:pVAXD-N-Sa/XhoI；