[发明专利]手掌参抗肿瘤提取物及其组合物的医药用途和制备方法

说明书

技术领域

本发明属医药技术领域，具体涉及一种维吾尔药手掌参抗肿瘤提取物及其组合物的医药用途和制备方法以及它在制备预防及治疗脑胶质瘤、肝癌、肺癌、胃癌、结肠癌、胰腺癌、乳腺癌、宫颈癌等恶性肿瘤药物中的应用。

背景技术

手掌参拉丁名Gymnadenia conopsea (L.) R. Br.，又称手参、掌参、手儿参、佛手参，为兰科植物手参或粗脉手参的块根。青藏高原稀有药材，生长在海拔3000-4000米高山灌木丛中，因为外形像手掌而得名。生于海拔265-4700米的山坡林下、草地或砾石滩草丛中。干燥块茎形如手掌，指状分裂，通常4～6裂不等，稍扁，长2.5～3.5厘米，径2～2.5厘米，表面皱缩，淡黄色，有时茎痕周围有1褐色环。

手掌参的全草含挥发油6%，内有甲基香醛，向日葵素。块根中含粘液质、淀粉、蛋白质、糖分、草酸钙、无机盐。性平味甘，止咳平喘；益肾健脾；理气和血；止痛。治肺虚咳喘，虚劳消瘦，神经衰弱，久泻，失血，带下，乳少，慢性肝炎。手参地下茎的水提取物对兔、犬有利尿作用,但剂量过大反能降低尿量。对蛙下肢血管呈收缩作用，对小鼠的全身状态则呈抑制作用。

本发明在深入地研究手掌参的抗癌活性时意外地发现，手掌参除了具有诱导白血病细胞凋亡的功效外，亦具有很好的脑胶质瘤、乳腺癌、宫颈癌、肝癌、肺癌、胃癌、结肠癌、胰腺癌等恶性肿瘤的预防及治疗作用，该活性提取物及其组合物有望应用到多种癌症的预防和治疗上。

发明内容

本发明所解决的技术问题是提供一种手掌参提取物。

本发明还提供了以手掌参提取物为主要活性成分的组合物。

本发明同时提供了手掌参提取物及其组合物的制备和应用。

本发明是通过如下技术方案实现的：

维吾尔药手掌参经水超声提取，提取液浓缩后，用硅胶（SiO₂）柱分离，上样后的硅胶柱，用二氯甲烷-甲醇混合溶剂梯度洗脱（二氯甲烷-甲醇，比例见表1），各二氯甲烷-甲醇比例混合溶剂洗脱液，浓缩，干燥后，利用体外抗肿瘤活性筛选体系测试其抗肿瘤活性，意外地发现先用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:0，体积比）洗脱，继用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:1，体积比）洗脱，洗脱得到的二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:1，体积比）洗脱液经回收有机溶剂，干燥，即为抗肿瘤活性提取物，而其他比例的洗脱组分，不具有抗肿瘤活性。特别地，优选为先用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:1，体积比）洗脱10倍柱体积，继用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:1，体积比）洗脱15倍柱体积，洗脱液干燥后即为本发明抗肿瘤活性的提取物。抗肿瘤活性的提取物可以通过以上方法得到富集，从而与其他杂质类成分分离开。该抗肿瘤活性提取物从未见文献报道，其薄层谱色谱（TLC）分析表征如图1，TLC分析条件：GF₂₅₄硅胶板，展开系统：二氯甲烷：乙酸乙酯：甲醇（6:1:1）。显色方法：香草醛浓硫酸显色。

具体，发现过程如下：

1、手掌参经甲醇超声提取物的制备

取维吾尔药手掌参20 g，经100 ml水超声提取15 min，提取液浓缩后，得提取物SN0215B  0.2076 g，二氯甲烷-甲醇系统洗脱。

2、二氯甲烷-甲醇混合溶剂梯度洗脱方法和结果

取维吾尔药手掌参20 g，经100 ml水超声提取15 min，提取液浓缩后，得提取物SN0215B  0.2076 g。上柱，甲醇溶解，共用甲醇15 ml。上硅胶柱色谱，拌样硅胶0.6g，空白硅胶5g，玻璃柱内径1.5cm，二氯甲烷-甲醇系统梯度洗脱（条件见表1），柱体积11ml，每个梯度洗脱100 ml，得到，各个浓度提取洗脱液的洗脱物，回收溶剂，即得，二氯甲烷-甲醇梯度洗脱提取物，TLC分析结果见图2，，图3。图2的TLC分析条件：GF₂₅₄硅胶板，展开系统：二氯甲烷：乙酸乙酯：甲醇（6:1:1）。显色方法：香草醛浓硫酸显色。图3的TLC分析条件：GF₂₅₄硅胶板，展开系统：二氯甲烷：乙酸乙酯：甲醇（1:1:1）。显色方法：香草醛浓硫酸显色。

3、抗肿瘤活性筛选方法和结果

1）实验条件

a) 细胞株信息

大鼠脑胶质瘤细胞株C6购于中国典型培养物保藏中心细胞库。

b) 药品及试剂