[发明专利]一种大肠埃希氏菌株HY‑05C高密度培养方法

权利要求书

1.一种大肠埃希氏菌株HY-05C的高密度培养方法，其特征在于，大肠埃希氏菌株HY-05C，保藏编号为CGMCC No.5450；

将大肠埃希氏菌株HY-05C进行液体培养，包括如下步骤：

1) 菌株HY-05C斜面菌种活化：将冷冻保存的大肠埃希氏菌株HY-05C接种到装有活化培养基试管斜面中，35-37℃培养24-36小时，挑取培养好的斜面菌苔接入另一支活化用试管斜面中，35-37℃培养24-36小时，再转接另一活化斜面，35-37℃培养24-36小时即得活化斜面菌种；

2) 制备菌株HY-05C一级种子液：取步骤1）得到的大肠埃希氏菌株HY-05C活化斜面菌种，接种到装有高密度培养培养基的三角瓶中进行培养，200rpm、35~37℃、摇床培养6-8小时，得到一级种子液；

3) 制备菌株HY-05C二级种子液：取步骤2）得到的一级种子液以体积比1-2‰接种量转接到装有高密度培养培养基发酵罐中进行扩大培养，控制通风比0.3-0.6vvm，相对溶解氧浓度20-40%，搅拌，罐压0.05-0.07MPa，35~37℃培养7-9小时，得到大肠埃希氏菌株HY-05C二级种子液；

4) 制备菌株HY-05C转化用培养液：将步骤3）培养好的大肠埃希氏菌株HY-05C二级种子液以体积比5-10%接种量转接到高密度培养培养基中进行扩大培养，控制通风比0.15-0.25vvm，相对溶解氧浓度20-40%，搅拌，罐压0.05-0.08MPa，35~37℃培养8-10小时，制得大肠埃希氏菌株HY-05C转化用培养液；

步骤1）中，所述活化培养基所必需的营养物质包括：富马酸铵10；牛肉膏10；蛋白胨7；氯化钠5；磷酸二氢钾1；硫酸镁0.2，琼脂15~20，pH7.0~7.2，单位为g/L；

步骤2）中，所述的高密度培养培养基所必需的营养物质包括：富马酸铵7~12；玉米干粉6~8；酵母粉1~4；蛋白胨6~8；氯化钠5；磷酸二氢钾1；硫酸镁0.2，单位为g/L。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2）中，所述的高密度培养培养基为：富马酸铵10；玉米干粉8；酵母粉2；蛋白胨7；氯化钠5；磷酸二氢钾1；硫酸镁0.2，pH 6.5,单位为g/L。