[发明专利]一种基于纳米银及纳米铜联合构建的双通道乳腺癌易感基因传感器的制备方法及应用

权利要求书

1.一种基于纳米银及纳米铜联合构建的双通道乳腺癌易感基因传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）依次用1.0、0.3、0.05 μm的氧化铝粉末对玻碳电极进行抛光，分别在超纯水和乙醇中超声清洗，氮气吹干；

（2）在电极表面滴加6 μL浓度为1 ~ 2 mg/mL的金纳米粒子水溶液，干燥；

（3）继续将6 μL浓度为8 ~ 12 μg/mL的乳腺癌易感基因1和乳腺癌易感基因2的捕获抗体溶液滴加到修饰电极表面，于4℃冰箱中孵化1 h，清洗干净；

（4）用3 μL浓度为5 ~ 15 mg/mL的牛血清白蛋白溶液封闭非特异性活性位点，于4℃冰箱中孵化1 h，清洗干净；

（5）将6 μL浓度为0.000001~ 20 ng/mL的一系列不同浓度的乳腺癌易感基因1和乳腺癌易感基因2用于和对应的捕获抗体的特异性识别，室温下孵化1 h，清洗干净；

（6）将6 μL制备好的纳米银标记的乳腺癌易感基因1的检测抗体溶液和纳米铜标记的乳腺癌易感基因2的检测抗体溶液滴在电极上与对应的乳腺癌易感基因进行特异性识别，室温下孵化1 h，清洗干净，于4℃冰箱中储存备用。

2.如权利要求1所述的一种基于纳米银及纳米铜联合构建的双通道乳腺癌易感基因传感器的制备方法，所述纳米银标记的乳腺癌易感基因1的检测抗体溶液和纳米铜标记的乳腺癌易感基因2的检测抗体溶液的制备，其特征在于，包括以下步骤：

（1）纳米银标记的乳腺癌易感基因1的检测抗体溶液的制备

在室温下，向100 mL冰水中加入5 ~ 10 mg硼氢化钠，待其溶解后，在搅拌下向冰水中逐渐滴加3.4 ~ 6.8 mg硝酸银溶液，观察得到金黄色透明的溶液，继续搅拌1 h后，即可得到浓度约为0.2 ~ 0.4 mM分散均匀的纳米银溶液，取10 ~ 20 mL该纳米银溶液与1 mL浓度为10 ~ 20 μg/mL乳腺癌易感基因1的检测抗体混合，震荡12 h，离心洗涤后分散在1 mL超纯水中，制得纳米银标记的乳腺癌易感基因1的检测抗体溶液，于4℃冰箱中储存备用；

（2）纳米铜标记的乳腺癌易感基因2的检测抗体溶液的制备

将10 ~ 20 mL浓度为0.3 mol/L的多巴胺水溶液在磁力搅拌下加热到80℃，随后，向该溶液中逐渐滴加10 ~ 20 mL浓度为0.1 mol/L的氯化铜溶液，加热6 h，得到黑色溶液，即为纳米铜溶液，取10 ~ 20 mL该纳米铜溶液与1 mL浓度为10 ~ 20 μg/mL乳腺癌易感基因2的检测抗体混合，震荡12 h，离心洗涤后分散在1 mL超纯水中，制得纳米铜标记的乳腺癌易感基因2的检测抗体溶液，于4℃冰箱中储存备用。

3.如权利要求1所述的制备方法制备的一种基于纳米银及纳米铜联合构建的双通道乳腺癌易感基因传感器，其特征在于，用于乳腺癌易感基因1和乳腺癌易感基因2的检测，检测步骤如下：

（1）使用电化学工作站以三电极体系进行测试，饱和甘汞电极为参比电极，铂丝电极为辅助电极，所制备的免疫传感器为工作电极，在10 mL的pH值为7.4的磷酸盐缓冲溶液中进行测试；

（2）选择方波伏安法对乳腺癌易感基因1和乳腺癌易感基因2进行检测，在-0.8 ~ 0.8 V下进行扫描，记录电流变化，绘制工作曲线；

（3）将待测样品溶液代替乳腺癌易感基因1和乳腺癌易感基因2标准溶液进行检测。

4.如权利要求1所述的制备方法制备的一种基于纳米银及纳米铜联合构建的双通道乳腺癌易感基因传感器，所述乳腺癌易感基因为乳腺癌易感基因1和乳腺癌易感基因2。