[发明专利]hsa‑miR‑1280在非小细胞肺癌中的作用及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及miRNA在癌症诊断中的应用，以及其用作非小细胞肺癌的诊断用途。

背景技术

肺癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率均位于恶性肿瘤之首。非小细胞肺癌(Non-Small Cell Lung Cancer，NSCLC)约占其80％，近些年疗效虽有提高，但长期生存率仍较偏低，绝大多数患者确诊时已是癌症晚期，只能采取姑息性治疗，预后较差。

侵袭和转移是癌细胞从原发性部位转移到远端部位形成肿瘤的过程，它是一个多步骤、多因素参与的复杂生物学过程，是导致NSCLC复发和影响预后的重要因素，也是导致患者死亡的主要原因，目前对NSCLC的侵袭和转移机制尚不清楚。一直以为肿瘤的发生是由一系列致癌基因和抑癌基因突变逐步形成的，但随着非编码RNA的发现，此传统观念被改变。最近的研究表明，非编码RNA中的成员microRNA分子广泛参与了肿瘤侵袭和转移过程中的基因表达调控，这一发现为肿瘤转移的诊断和治疗提供了新的思路。

microRNA是由内源基因编码，长约19-24nt的非编码小RNA，可通过形成RNA诱导沉默复合体(RNA induced silencing complex,RISC)与靶基因3’端非翻译区(untranslated region,UTR)互补结合，诱导mRNA的切割降解，翻译抑制或其他形式的调节机制抑制靶基因的表达。目前已发现的人类microRNA已达1000多种，超过50％的microRNA基因定位于肿瘤相关的染色体座位或其易感位点，并证实部分microRNA异常表达与特定的肿瘤有着密切的关系，并参与了恶性肿瘤发展的多个过程，包括细胞分化、增殖、侵袭和转移。

microRNA在NSCLC的侵袭和转移中起至关重要的作用。Grawford等将miRNA-126转染入肺鳞癌细胞系，与空白对照组及转染入无序pre-microRNA的细胞相比，前者细胞的侵袭和转移能力下降。Yu等将高危险性(死亡危险比>1)的microRNA前体和保护性(死亡危险比<1)的microRNA前体分别转染入低侵袭性和高侵袭性的肺癌细胞系中，发现转入高危险性microRNA的肺癌细胞系渗入基质胶膜的侵袭性增强，而转染保护性microRNA的肺癌细胞系侵袭性降低，表明这些microRNA与肺癌的侵袭转移相关。Zhang等利用茎环状反转录实时PCR方法(stem-loop qRT-PCR)对20对NSCLC和癌旁组织的miR-21进行了定量，并利用western blot技术检测了miR-21的靶基因PTEN的表达情况，发现miR-21在NSCLC中有较高的表达，而抑癌基因PTEN的蛋白表达情况则相反，接着将载有miR-21转录抑制子的质粒转染NSCLC细胞，结果显著降低了细胞的生长和侵袭作用，表明miR-21的表达降低了抑癌基因PTEN的表达，促进了NSCLC细胞的生长和侵袭。Zhu等的研究也发现，miR-21通过靶向多个肿瘤转移抑制基因，调控乳腺癌、肺癌的侵袭和转移。Wang等用microRNA芯片技术筛选出了在肺癌和癌旁两种细胞中有显著表达差异的miR-183，并发现miR-183与肺癌细胞的转移潜能负相关，推测其为潜在的转移抑制因子，进一步的研究发现，miR-183的过表达抑制了肺癌细胞的转移和侵袭。

microRNA的研究不仅为肿瘤发生发展机制的探明提供了新的思路和方法，而且在临床诊疗和预后评估方面显示了很高的应用价值。microRNA参与了肿瘤发生发展的各个阶段，每一个阶段都有相应的microRNA发生变化。而且，microRNA具有很好的组织特异性，经筛查检测48个microRNA确定肿瘤的组织来源准确率达90％。同时，microRNA又具有肿瘤发生的阶段特异性，同一种肿瘤在发生发展不同分期阶段具有不同的microRNA表达谱。因此，microRNA可以作为一种有效的肿瘤标志物用于癌症的早期诊断、恶性分级、个性化诊疗和预后判断等，甚至可以作为肿瘤治疗的靶点，指导临床用药。