[发明专利]还原触发型多肽修饰透明质酸偶联物载体及其制备

说明书

技术领域

本发明属于制药领域，公开了一种具有还原触发型多肽修饰透明质酸偶联物载体及其制备方法。

背景技术

恶性肿瘤是严重危害人类生命健康的重大疾病之一，已被列为人类面临的“第二号杀手”(仅次于心血管疾病)，导致全球大约13％的死亡率。据世界卫生组织(World Health Organization，WHO)统计，癌症患者数量呈逐年递增趋势，每年全世界有近100万人被诊断出癌症，预测2005-2015年之间将有超过8000万人死于癌症。

在癌症的治疗中，化疗在绝大多数的肿瘤特别是中晚期肿瘤的治疗中占有极其重要的地位，然而，目前的小分子化疗药物严重缺乏靶向性，在癌症治疗的同时也会损伤健康的器官和组织，导致局部或全身副作用。除此之外，许多化疗药物还存在溶解度低、稳定性差以及容易引发多药耐药等问题。这些原因严重限制了抗肿瘤药物的临床使用。

为开发新的安全有效的肿瘤治疗策略，药剂学家们提出了药物传递系统的概念，希望借此来解决当前肿瘤治疗过程中面临的诸多问题，理想的药物传递系统至少具备以下特点：1)生物相容性好，对人体无害；2)能够稳定高效负载药物；3)具有药物缓释作用，降低药物的毒副作用；4)能够将药物选择性地输送至肿瘤部位，提高药物疗效。

聚合物纳米载体被认为是最有前景的药物传递系统之一，因其优良的药物递送性能而备受关注，其优点在于能够增溶难溶性药物，提高药物的生物利用度，而且其纳米级粒径可以避免被巨噬细胞识别和吞噬，可借助载体自身的靶向机制特异性地将药物递送至肿瘤组织中，发挥更好的疗效降低毒副作用。

为了提高药物治疗的有效性和安全性，可选择性地浓集于肿瘤组织，经肿瘤部位环境刺激(如pH、温度、氧化还原信号及离子强度等)而释药的刺激响应型药物递送系统的研发成为热点。在众多的刺激响应型纳米载体中，基于细胞内与细胞外还原型谷胱甘肽(GSH)浓度的显著性差异设计的还原敏感型药物递送系统被广泛研究。

透明质酸(hyaluronic acid，HA)是一种存在天然的糖胺聚糖，在人体中广泛存在，并发挥着重要的生理作用。由于具有无毒无免疫原性，较好的生物相容性、生物可降解及易于修饰等特性，HA常在给药系统的构建中作为主动靶向基团而应用，已成为药物递送研究的热点。HA受体如CD44和RHAMM在多种肿瘤细胞表面大量表达，因此，这些肿瘤细胞通过受体介导的内吞可以增强与HA的结合及内化，使活性药物在细胞内释放，从而发挥药效。经疏水化改性的HA纳米粒呈球形，具有良好的生物相容性、靶向性、缓释性，具有较高的载药量和包封率，是疏水性小分子抗癌药物的理想载体。

发明内容

针对以上问题，本专利首次以天然多糖透明质酸为骨架，通过还原敏感性的连接臂桥接透明质酸和疏水基团，然后利用酰胺键将透明质酸和肿瘤靶向亲水基团偶联，所得偶联物具有两亲性，在水中可自组装为纳米粒，为抗肿瘤药物的理想载体。

因此，本发明的目的是提供一种还原触发型多肽修饰透明质酸偶联物载体。该载体能够在血液循环系统中保持结构稳定，借助被动靶向作用和主动靶向性将内部携带的抗肿瘤药物最大程度地富集于肿瘤后，骨架中的还原敏感键响应其还原敏感性，使载体发生解聚，迅速释放药物，有效发挥肿瘤抑制作用，同时降低对正常组织器官产生的毒副反应，从而克服现有技术中的不足。

本发明提出的偶联物载体主要是由透明质酸、通过还原敏感键与透明质酸结合的疏水基团、肿瘤靶向亲水基团和药物形成的纳米粒，

其中，所述纳米粒的外壳主要由透明质酸和肿瘤靶向亲水基团构成，内核主要由所述疏水基团和药物构成。

进一步地，所述还原敏感键优选二硫键。

本发明在构建纳米载体的基础上，采用动态光散射法考察载体的还原敏感性。

当纳米载体在还原性物质(如还原性谷胱甘肽、二硫苏糖醇(DTT))的各种水平下，其平均粒径发生不同程度变化。结果见表1。

表1：纳米载体在不同DTT水平下的粒径变化

从表中可以看出，当纳米粒在含10μM DTT PBS 7.4条件下，24h粒径几乎无变化，说明在其模拟的循环系统的生理条件下，纳米粒结构完整、稳定。当其在含20mM DTT PBS 7.4条件下，纳米粒粒径明显增大，且多分散系数(PDI)值达0.561，说明纳米粒在高浓度DTT条件下，载体发生解聚，导致其结构松散而致。因此本发明中优选的二硫键的存在可以使纳米载体有效发挥还原敏感性。

本发明中，前述疏水基团优选胆固醇氯甲酸酯，与透明质酸投料摩尔比为2％～10％，但不限于此。