[发明专利]一种金枪鱼蒸煮液活性肽及其制备方法和糖尿病治疗用途

说明书

本发明公开了一种具有二肽基肽酶Ⅳ（DPP‑Ⅳ）抑制活性的金枪鱼蒸煮液活性肽及其制备方法和用途，该活性肽的氨基酸序列为Cys‑Tyr‑Trp‑Gln‑Pro‑Ile（CYWQPI），ESI‑MS测定分子量为808.15 Da。金枪鱼蒸煮液经超滤、酶解和色谱制备，得活性肽Cys‑Tyr‑Trp‑Gln‑Pro‑Ile（CYWQPI）。本发明制备工艺科学合理，制备的活性肽具有显著的二肽基肽酶Ⅳ（DPP‑Ⅳ）抑制活性，可用于糖尿病治疗相关的药物。

技术领域

本发明涉及一种金枪鱼蒸煮液活性肽，本发明还涉及该活性肽的制备方法，本发明还涉及该活性肽在糖尿病治疗药物方面的用途。

背景技术

糖尿病分为两种类型：胰岛素依赖型Ⅰ型和非胰岛素依赖型Ⅱ型，而Ⅱ型糖尿病占糖尿病患者的90%以上。目前，随着对糖尿病病理生理机制的深入研究，针对不同病理生理环节的药物开发越来越多。二肽基肽酶Ⅳ（DPP-Ⅳ）抑制剂就是目前开发的一种新颖、有效的降糖药之一。它能有效抑制DPP-Ⅳ的活性，增强肠促胰岛素活性，从而降低血糖，目前已成为糖尿病药物治疗新的焦点。

金枪鱼年产量超过600万吨，占公海渔业总产量的70%以上。金枪鱼罐头制备时，蒸煮是关键步骤之一，导致部分蛋白质溶解在蒸煮液中。目前，蒸煮液基本直接排掉，不仅造成蛋白质资源浪费，还会污染环境。因此，采用合理的技术，对金枪鱼蒸煮液中的蛋白资源加以回收利用，可有效提高金枪鱼原材料的利用率，创造经济效益，同时还可以保护环境，具有重要的意义。

目前，申请人研究发现，以金枪鱼蒸煮液为原料，利用超滤技术浓缩蒸煮液，以酶解技术制备具有二肽基肽酶Ⅳ（DPP-Ⅳ）抑制活性的活性肽的工艺研究处于空白阶段，而相关活性肽的应用更是未见报道。

发明内容

本发明所要解决的第一个技术问题是针对上述的技术现状提供一种金枪鱼蒸煮液活性肽，该活性肽具有较强的二肽基肽酶Ⅳ（DPP-Ⅳ）抑制活性。

本发明所要解决的第二个技术问题是提供一种具有DPP-Ⅳ抑制活性的金枪鱼蒸煮液活性肽的制备方法，该工艺科学合理、易于操作。

本发明所要解决的第三个技术问题是提供一种具有DPP-Ⅳ抑制活性的金枪鱼蒸煮液活性肽在糖尿病治疗药物方面的应用。

本发明为解决上述第一个技术问题所采取的技术方案为：一种金枪鱼蒸煮液活性肽，其特征在于该活性肽的氨基酸序列为Cys-Tyr-Trp-Gln-Pro-Ile（CYWQPI），ESI-MS测定分子量为808.15 Da。

本发明为解决上述第二个技术问题所采取的技术方案为：一种具有DPP-Ⅳ抑制活性的金枪鱼蒸煮液活性肽的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1）取适量金枪鱼蒸煮液，用0.02~0.10 μm微滤膜去除颗粒杂质后，用膜孔径为10~50 kDa的聚醚砜膜，于压力125~150 kPa、温度25~30 ℃、pH 7.0~8.0、流速1.5~3.0 mL/s的条件下进行超滤处理，得金枪鱼浓缩蒸煮液；

2）将制备的金枪鱼浓缩蒸煮液于30~35 ℃保温10 min，按照1mg蛋白酶:3~5 mL浓缩蒸煮液的比例加入蛋白酶，酶解4~6 h；

3）将酶解浓缩蒸煮液依次经超滤和层析，得到活性肽。

作为优选，所述步骤1）中的金枪鱼为长鳍金枪鱼、黄鳍金枪鱼或鲣鱼。

作为优选，所述步骤2）中的蛋白酶为蛋白酶XXIII，酶活力≥4.0×10³ U/g。

作为改进，所述步骤3）的超滤和层析的具体过程为：

超滤：将酶解浓缩蒸煮液采用1 kDa的超滤膜进行超滤处理，收集分子量小于1kDa组分，即超滤酶解液；