[发明专利]一种东南亚型地中海贫血的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种东南亚型地中海贫血的检测技术，具体涉及一种东南亚型地中海贫血致病基因的检测方法。

背景技术

地中海贫血（thalassemia，简称：地贫）是一组严重威胁人类健康的致死、致残的遗传性血液病，因最早发现于地中海地区而得名。其共同特点是珠蛋白基因缺陷使血红蛋白中的珠蛋白肽链合成减少或不能合成，导致慢性溶血性贫血。根据合成障碍的肽链不同可把地贫分为α、β、δ、δβ、γδβ等类型，其中以α-和β-地贫最为常见。在我国，地贫高发于长江以南各省区，其中α-地贫基因携带者检出率为2%-18%，β-地贫为1%-7%。地贫基因携带者之间婚配可使下一代有1/4 的概率患有重症地贫。重型α-地贫患儿死胎或出生后就死亡。重型β-地贫患者除干细胞移植外尚无其他有效的根治方法，需输血以维持生命，大部分患者死于成年之前，东南亚型（southeast asian, 简写：SEA）地中海贫血属于α-地贫的一种。

目前国内的各级医疗系统对于地中海贫血的筛查主要采用如下的方法：先用红细胞渗透脆性一管法（基础医疗系统和计生系统的主要方法）和/或血液学表型筛查（MCV、MCH）进行地贫筛查，然后对筛查阳性的样本进行基因诊断。红细胞渗透脆性一管法是利用地贫红细胞的渗透脆性与正常人红细胞的渗透脆性不同的原理来进行筛选的，它的优点是方法简便经济、适合基层单位的使用，但是它同时也存在着特异性差，误诊率高的缺点。在筛选出疑似地贫的患者的同时，有大量的缺铁性贫血等非地贫的红细胞脆性相关疾病被误筛。血液学表型筛查（MCV、MCH）的筛查方法是《地中海贫血预防控制操作指南》推荐的方法，性价比高，筛查准确，在血球仪准确度得到保障的情况下，以MCV<82fL为标准，可以筛查出近100%的轻型α及β地贫的基因携带者，但目前只有部分基层单位及计生系统拥有血球仪，由于日常样本量少，无法购买仪器配套的质控品及参加国家的血常规的全国室间质控，因此准确度无法得到保障，从而限制了这种方法的普及。此外，血液学表型筛查法无法检出部分静止型地贫，说明其敏感性远不如基因诊断方法。

目前地贫基因诊断普遍使用跨越断裂点的聚合酶链式反应（Gap-PCR）诊断缺失型α-地贫，PCR结合反向斑点杂交技术（PCR-RDB）诊断β-地贫及突变型α-地贫。Gap-PCR需要通过琼脂糖凝胶电泳分析产物，耗时且产物易污染；PCR-RDB需要PCR扩增、产物变性、杂交等多个步骤，操作复杂繁琐，耗时长。这些基因诊断方法一来成本较高（约400元/人份），无法对广泛人群进行普查，二来开展这些项目对场地、仪器、人员素质要求较高，也很难在基层医院和农村地区广泛推广。受阻突变体系聚合酶链反应（AMRS-PCR）、多重连接探针扩增技术（MLPA）、高效变相液相色谱（DHPLC）、高分辨率溶解曲线（HRM）与PCR-测序的方法也被用于地贫的研究，但是这些方法同样存在上述两个问题。

专利申请号为201110098786.1的发明专利提供了一种抗体检测SEA型地贫特异性珠蛋白的方法，此方法检测靶点为地中海贫血特异性蛋白。专利申请号为201110081598.8的发明专利提供了一种检测SEA珠蛋白基因缺失的荧光定量PCR试剂盒，此方法需要使用荧光定量PCR仪，在专门的PCR室进行操作。专利申请号为200710074203.5的发明专利提供了一种检测SEA地中海贫血的核酸膜条，该方法需要将待测样本扩增后与核酸杂交膜条进行杂交显色。以上方法均不能达到快速简便、可在基层医院及农村操作的要求。

综上所述，目前地贫检测需要研究一种新的敏感性高、成本低、操作简单、快速的地贫检测方法，才能更好的符合我国国情，满足基层医院和广大农村进行广泛地贫防控的需要，真正有效的减少重症地贫患儿的出生，减少社会及家庭的负担。

发明内容

（1）要解决的技术问题

本发明为了克服现有东南亚型地中海贫血检测方法中存在的敏感性低、成本高、操作复杂、耗时长的缺点，本发明要解决的技术问题是提供一种敏感性高、成本低、操作简单、快速的东南亚型地中海贫血的检测方法。

（2）技术方案

为了解决上述技术问题，本发明提供了这样一种东南亚型地中海贫血的检测方法，包括以下步骤：

a、设计SEA地中海贫血特异性LAMP引物和人基因组内参LAMP引物，包括SEA-FIP、SEA-BIP、SEA-F3、SEA-B3、control-FIP、control-BIP、control-F3、control-B3共8条引物；

所设计的SEA地中海贫血特异性LAMP引物如下：