[发明专利]检测花生FAD2基因SNP等位变异的引物、探针及方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测花生FAD2基因SNP等位变异的引物、探针及方法，属于分子生物学技术领域。

背景技术

花生是重要的油料作物，其籽粒脂肪酸的组成是衡量花生品质的重要指标。从油脂稳定性角度看，高油酸/亚油酸比值(O/L比)的花生及其制品不易氧化和腐败，货架期较长。有研究表明烘焙后的高油酸花生较普通油酸含量花生贮存期延长8倍(Mozingo et al.,2004)；而高油酸花生压榨的花生油较普通油酸含量品种贮藏期延长高达14倍(O’Keefe et al.,1993)。从对人体健康角度考虑，油酸有益于维持有益胆固醇高密度脂蛋白(HDL)水平，增强胰岛素敏感性，还可以改善一些炎症(Mesa Garcia et al.,2006；Vassiliou et al.,2009)。为了提高油脂的稳定性，工业上常通过加氢提高油脂的饱和度，这往往在碳链中引入反式双键生成反式脂肪酸，长期食用会大大增加罹患心脑血管病的几率。因此，提高花生籽粒的油酸含量和O/L比值是花生油脂遗传改良的主要目标。

FAD2是控制植物籽粒油酸、亚油酸含量的关键酶，它催化油酸在碳12位去饱和产生亚油酸。花生是异源四倍体(2n＝4X＝40)，AhFAD2A和AhFAD2B是位于不同基因组上的非等位基因，这两个基因对油酸、亚油酸含量均有贡献，只有这两个基因转录受到抑制或酶活降低，籽粒才表现出高油酸性状。美国上世纪80年代通过化学诱变和自然突变筛选获得的一些高油酸突变体(如F435，8-2122，M2-225，MF)(Norden et al.,1987；Ashri,1988)，一直作为亲本沿用至今。这些品种或品系籽粒油酸含量都在80％左右。分析F435及其衍生系高油酸性状的遗传基础发现，AhFAD2A基因编码区448nt处核苷酸序列由G→A的碱基替代，编码的氨基酸由天冬氨酸D变为天冬酰胺N，AhFAD2A酶活性大幅降低；同时AhFAD2B基因编码区442nt处1个A碱基插入，导致编码蛋白提前终止。针对上述突变体及衍生系AhFAD2A和AhFAD2B基因的SNP差异，近年来开发了多种用于检测的标记和检测方法，如酶切扩增多态性序列法(CAPS,cleaved amplified polymorphic sequence)、等位基因特异PCR(AS-PCR,Allele-Specific PCR)、测序法和荧光定量PCR法，从而实现对高油酸花生育种进行辅助选择(Jung et al.,2000a；Chu et al.,2007；Chu et al.,2009；Chen et al.,2010)。我国目前也培育出了几个高油酸花生品种，如山东花生研究所的培育的花育32(2009年山东省审定)、花育51和花育52，河南省开封市农林科学研究院开农H03-3、开农61、开农176、开17-15，河北省冀花11号、13号等。这些品种与突变体F435AhFAD2A基因在448nt处以及AhFAD2B基因在442nt处的突变位点相同。可以使用相同的标记和检测方法检测。