[发明专利]一种用于检测水痘带状疱疹病毒的引物、探针和试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种用于检测水痘带状疱疹病毒的引物、探针和试剂盒。

背景技术

水痘带状疱疹病毒(Varicella zoster virus，VZV)属于疱疹病毒科α亚科，是DNA病毒，目前被正式命名为人疱疹病毒3型(Human Herpesvirus3，HHV-3)，其唯一的宿主是人类，目前认为该病毒只有一个血清型。该病毒是水痘和带状疱疹的病原体，不耐酸，不耐热，对外界抵抗力较弱，能被乙醚灭活，但是传染性极强，90％的人在成年之前就已经感染了VZV。VZV经呼吸道黏膜进入人体形成原发感染，临床表现为水痘。水痘是儿童期常见的疾病之一，传染性强，在出疹性疾病中水痘的传染性仅次于麻疹，多见于10岁以下儿童。

实验室诊断方法为膜抗原免疫荧光抗体检测试验(FAMA)，FAMA法需采集急性期与恢复期双份血清，样本的提取时间较长，使得该检测达不到快速诊断的目的。

发明内容

为了解决现有技术不能实现快速诊断的问题，本发明实施例提供了一种用于检测水痘带状疱疹病毒的引物、探针和试剂盒。所述技术方案如下：

一方面，本发明实施例提供了一种用于检测水痘带状疱疹病毒的引物和探针，所述引物和探针包括：用于检测水痘带状疱疹病毒的正向引物、用于检测水痘带状疱疹病毒的反向引物和用于检测水痘带状疱疹病毒的探针，其中，

用于检测水痘带状疱疹病毒的正向引物如序列表中SEQ ID NO.1所示；

用于检测水痘带状疱疹病毒的反向引物如序列表中SEQ ID NO.2所示；

用于检测水痘带状疱疹病毒的探针如序列表中SEQ ID NO.3所示；

所述探针的5’端连接有荧光基团FAM、HEX、TET、JOE、VIC、ROX、Cy3或Cy5，所述探针的3’端连接有淬灭基团TAMRA、Eclipse、BHQ1、BHQ2、BHQ3或DABCYL。

另一方面，本发明实施例提供了一种用于检测水痘带状疱疹病毒的试剂盒，所述试剂盒包括上述的引物和探针。

具体地，所述试剂盒还包括：核酸释放剂、PCR反应液、临界阳性质控品、阳性质控品、阴性质控品和工作标准品。

具体地，所述工作标准品包括：工作标准品1、工作标准品2、工作标准品3和工作标准品4，其中，

所述工作标准品1为1×10⁷拷贝/mL的所述水痘带状疱疹病毒的基因片段；

所述工作标准品2为1×10⁶拷贝/mL的所述水痘带状疱疹病毒的基因片段；

所述工作标准品3为1×10⁵拷贝/mL的所述水痘带状疱疹病毒的基因片段；

所述工作标准品4为1×10⁴拷贝/mL的所述水痘带状疱疹病毒的基因片段。

具体地，所述阳性质控品为1.0×10⁶拷贝/mL的所述水痘带状疱疹病毒的基因片段。

具体地，所述正向引物和所述反向引物的终浓度均为0.05-0.9μM，所述探针的终浓度为0.05-0.9μM。

具体地，所述PCR反应液各组分在PCR扩增反应体系中包括：终浓度为0.01U/μL～0.05U/μL的Taq酶、终浓度为0.2～0.6mM的dNTPs、10×PCR缓冲液和终浓度为1.5～5.0mM的含Mg离子的溶液。

具体地，所述核酸释放剂包括：无菌水、终浓度为0.03-0.3％的聚乙二醇辛基苯基醚、终浓度为0.04-0.4％的壬基酚聚氧乙烯(40)醚和pH值为8.3的终浓度为0.01-0.1M的三(羟甲基)氨基甲烷。

具体地，所述临界阳性质控品为1.0×10⁴拷贝/mL的所述水痘带状疱疹病毒的基因片段。

具体地，所述阴性质控品为浓度0.8％的生理盐水。

本发明实施例提供的技术方案带来的有益效果是：本发明实施例提供的用于检测水痘带状疱疹病毒的引物和探针，具有灵敏度高的特性，使得本发明实施例提供的用于检测水痘带状疱疹病毒的试剂盒，具有灵敏度高的特性，同时，检测速度快，整个检测过程共仅需2～3小时，采用仪器收集荧光信号，避免了肉眼判断的主观性，其检测结果可靠，提高了检测的灵敏度，即使仅存在单拷贝的目的片段该试剂盒也可以进行有效的检测。

附图说明