[发明专利]新乌头碱对K562细胞生物学特性的改变

说明书

技术领域

本发明属于医学技术领域，涉及新乌头碱对K562细胞生物学特性的改变。

背景技术

附子为毛茛科植物乌头Aconitum carmichaeli Debx的子根的加工品。始载于《神农本草经》，其味辛、甘，性大热，有毒。归心、脾、肾经，具有回阳救逆，补火助阳，散寒除湿，止痛的功效，被称为“回阳救逆第一品”。具有镇痛、抗炎、抗癫痫、抗肿瘤、提高免疫功能等多种生理活性[1-3]。

现今生物医学领域内最热门的课题之一便是白血病细胞的诱导分化及逆转机制研究。白血病已经被公认为是严重危害人类生命健康的造血系统恶性肿瘤，其生物学特征是造血细胞增殖失控，使细胞不能分化成熟,使细胞的正常凋亡过程障碍，而出现异常分化细胞大量增殖。目前，白血病的治疗仍采用传统的大剂量联合化疗，该方法虽能快速杀灭癌细胞，具有作用明显，针对性强等特点，但同时其产生的副作用也不容忽视，化疗药物在作用于白血病细胞的同时，也作用于正常的细胞，容易抑制骨髓造血功能及免疫功能，损害肝肾，对心脏有毒性作用，引起胃肠道反应。通过化疗和放疗后，最终仍有80％左右患者复发了白血病，因残留的白血病细胞仍持续存在，很难获得长期无病生存。目前对于白血病K562细胞株尚无好的抑制方法。

本发明用Caco-2单层细胞培养法模拟中药血清药理学方法给药，观察云南特色有效的温阳药物大回阳饮中的新乌头碱对白血病细胞及其干细胞的诱导驯化作用，以此改变恶性细胞的阴阳状态，将其从静止封闭的阴态提升至激活开放的阳态，明确温阳中药有效成分对白血病及其干细胞生物特性的影响程度，为白血病尤其是白血病干细胞治疗久攻不下寻求突破的新途径。

发明内容

本发明涉及新乌头碱对K562细胞生物学特性的改变。

包括新乌头碱对K562细胞的抑制作用。

进一步，所述新乌头碱由包含在附子的有效成分提取液中。

进一步，所述附子的有效成分提取液提取的方法为：取附子粉末过三号筛2g，置具塞锥形瓶中，加氨试液3ml，加入异丙醇：乙酸乙酯为1:1的混合溶液50ml，超声处理，功率300W，频率40kHz，水温在25℃以下30分钟，放冷，用异丙醇：乙酸乙酯为1:1的混合溶液补足减失的重量，摇匀，过滤，量取续滤液25ml，40℃以下减压回收溶剂至干，残渣精密加入异丙醇：二氯甲烷为1:1的混合溶液3ml溶解，滤过，取续滤液，即得。

本发明的有益效果是：新乌头碱能诱导K562中的干细胞比例降低。新乌头碱明显抑制K562细胞的克隆形成。

附图说明

图1：Caco-2细胞单层绒毛面(扫描电子显微镜)(15000×)；

图2：已分化的Caco-2细胞单层顶端特性微绒毛(透射电子显微镜)(×20000)；

图3(a)K562细胞；

图3(b)50μg/ml新乌头碱作用K562细胞72h；

图4(a)K562细胞(×15000)；

图4(b)K562细胞(×2500)；

图4(c)50μg/ml新乌头碱作用K562细胞72h(×15000)；

图4(d)50μg/ml新乌头碱作用K562细胞72h(×2500)；

图5(a)阴性组；

图5(b)50μg/ml新乌头碱作用K562细胞14天。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明进行详细说明。

附子有效成分的提取

取本品粉末(过三号筛)约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加氨试液3ml，精密加入异丙醇-乙酸乙酯(1:1)混合溶液50ml，称定重量，超声处理(功率300W,频率40kHz，水温在25℃以下)30分钟，放冷，再称定重量，用异丙醇-乙酸乙酯(1:1)混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液25ml，40℃以下减压回收溶剂至干，残渣精密加入异丙醇-二氯甲烷(1:1)混合溶液3ml溶解，滤过，取续滤液，即得[4]。

附子有效成分提取液中含有新乌头碱，下面通过实验说明新乌头碱对K562 细胞的生物学特性的改变。