[发明专利]一种细胞因子颗粒及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物工程领域，尤其涉及利用生物工程技术制备的细胞因子颗粒及其在体外刺激单核细胞分化与扩增的应用。

背景技术

免疫细胞治疗技术的发展使免疫科学的应用发生重大变化，其针对肿瘤的疗效正在改变肿瘤患者的生存期和生存质量。例如，自体免疫细胞疗法，通过从肿瘤患者外周血中分离出单个核细胞，使用含有针对性的刺激因子的培养液，刺激淋巴细胞的增殖和分化，使其数量增多并具备抗瘤特异性，然后回输到肿瘤患者体内，对肿瘤有明显的治疗效果。这些应用的免疫细胞包括：LAK细胞，TIL细胞，CIK细胞，T细胞，NK细胞，DC细胞，DC-CIK细胞等。

体外淋巴细胞分化和扩增的效率取决于刺激因子，其中以细胞因子为主。对于一定数量的单个核细胞，不同的刺激方法和不同的细胞因子会使刺激效率造成较大差异，差异包括淋巴细胞增殖所需要的时间，细胞状态和活力。一般地，使用常规细胞因子蛋白刺激单个核细胞，因为细胞因子蛋白通常是小分子蛋白，对细胞的刺激作用较缓慢，而细胞增殖缓慢，会导致所获得的细胞总量中老化细胞所占的比例升高，从而影响整体细胞的状态和活力。因此，使细胞较快速度增殖，提高细胞整体状态的一致性，是保证整体细胞状态和活力的有效办法。

发明内容

针对现有技术的细胞因子蛋白单独作用效果较弱的不足，本申请进行了研究，寻求一种改善的刺激单个核细胞分化与扩增的方法，及其中利用的细胞因子颗粒。

为解决上述技术问题，本发明提供以下技术方案：

本发明提供一种细胞因子颗粒，其中，所述颗粒包括细胞因子和gag蛋白。

优选的，所述颗粒的表面负载或展示所述细胞因子。优选的，所述颗粒通过细胞分泌的方式形成。

优选的，所述颗粒还包括共刺激分子。更优选的，所述共刺激分子为CD137L。

优选的，所述的细胞因子，可以是一个或者多个。

优选的，所述的细胞因子，包括但不限于白细胞介素、干扰素、肿瘤坏死因子、集落刺激因子、生长因子和/或趋化性细胞因子。更优选的，所述细胞因子是白细胞介素。

本发明还提供一种表达载体系统，其中所述表达载体系统包括(1)包含重组蛋白gag基因序列的载体和(2)包含细胞因子基因序列的载体。

优选的，所述表达载体系统还包括共刺激分子基因。更优选的，所述共刺激分子为CD137L。

优选的，所述载体是质粒。更优选的，所述质粒为真核表达载体pCMV。

优选的，所述的细胞因子，可以是一个或者多个。

优选的，所述的细胞因子，包括但不限于白细胞介素、干扰素、肿瘤坏死因子、集落刺激因子、生长因子和趋化性细胞因子。更优选的，所述细胞因子是白细胞介素。

本发明还提供一种宿主细胞，其中，所述宿主细胞包含上述表达载体系统。优选的，所述宿主细胞表达细胞因子和gag蛋白，通过细胞分泌形成包含细胞因子和gag蛋白的颗粒。更优选的，所述颗粒还包含共刺激分子。更优选的，所述共刺激分子为CD137L。

优选的，所述的宿主细胞选自293T，293，A549等。

优选的，将所述表达载体系统导入宿主细胞中。优选的，所述的导入方法，包括但不限于磷酸钙转染，脂质体转染，阳离子转染、电穿孔转染，病毒载体导入，显微注射。

本发明还提供一种上述细胞因子颗粒的制备方法。

优选的，所述制备方法，包括将上述的宿主细胞在合适的条件下表达，通过细胞分泌形成颗粒。

优选的，颗粒上的表面可以负载和展示一种或多种细胞因子。

优选的，所述的gag基因序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示。

本发明还提供一种上述细胞因子颗粒在制备刺激单个核细胞分化和扩增试剂中的应用。

本发明还提供一种上述细胞因子颗粒在刺激单个核细胞分化和扩增中的应用。优选的，所述应用在体外进行。更优选的，所述应用不是治疗方法。

本发明还提供一种刺激单个核细胞分化和扩增的方法，将上述细胞因子颗粒体外对单个核细胞进行刺激。优选的，所述方法不是治疗方法。

优选的，根据不同的细胞因子组合可用于刺激单个核细胞分化成不同的免疫细胞类型，其中包括NK细胞和/或T细胞。