[发明专利]使产ESBLs的多重耐药菌敏感性恢复的方法

权利要求书

1.一种使产ESBLs的多重耐药菌敏感性恢复的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)选取临床产ESBLs的多重耐药菌为原始菌株，保藏备用；

(2)将所述原始菌株经增菌、分离制备成菌悬液；

(3)将所述菌悬液转种到一个血液增菌肉汤管，同时转种到一个分离平皿，分别传代培养18-24h，在所述分离平皿中形成菌落；然后观察所述菌落，若所述菌落单纯无污染，说明本次传代合格，若所述菌落有污染，则重新进行本次传代，直到所述菌落无污染为止；然后将所述血液增菌肉汤管中的菌悬液转种到另一个血液增菌肉汤管中并同时转种到另一个分离平皿中；重复以上步骤至少至20代；

(4)将步骤(3)得到的最后一个血液增菌肉汤管中的菌悬液转种到血培养皿中进行分离培养18-24h，产生典型菌落，对所述典型菌落进行药敏试验，同时与所述原始菌株的药敏进行比较，得出血液增菌肉汤管传代培养得到的细菌的药物敏感性恢复情况。

2.根据权利要求1所述使产ESBLs的多重耐药菌敏感性恢复的方法，其特征在于，所述产ESBLs的多重耐药菌为肺炎克雷伯菌ESBL或大肠埃希菌ESBL；所述肺炎克雷伯菌ESBL，保藏号CCTCC NO：M 2014594，保藏日期：2014年11月25日；所述大肠埃希菌ESBL，保藏号CCTCC NO：M 2014593，保藏日期：2014年11月25日。

3.根据权利要求2所述使产ESBLs的多重耐药菌敏感性恢复的方法，其特征在于，所述步骤(1)具体包括如下步骤：

取所述原始菌株的典型菌落接种到含有菌种保存液的尖底微量离心管内，-20℃低温保存，所述菌种保存液为15％甘油胰化酪蛋白大豆汤，其具体成分为：胰化酪蛋白17g/L，大豆胨3g/L，氯化钠5g/L，磷酸氢二钾2.5g/L，葡萄糖2.5g/L，其余为蒸馏水。

4.根据权利要求3所述使产ESBLs的多重耐药菌敏感性恢复的方法，其特征在于，所述步骤(2)具体包括如下步骤：

首先把所述冷藏的尖底微量离心管内的菌株经过增菌培养，所述增菌培养为取少量所述菌株加入增菌培养管内，置于35±1℃培养18-24h；然后再进行分离培养，所述分离培养具体步骤如下：用接种环蘸取所述增菌培养后的菌悬液，划线接种到营养琼脂平皿上，置于35±1℃培养18-24h，可见单一菌落，判定所述菌株有无污染，如无污染则该增菌培养物即为试验用菌悬液，若有污染则重新做上述步骤，直至无污染为止。

5.根据权利要求4所述使产ESBLs的多重耐药菌敏感性恢复的方法，其特征在于，所 述步骤(3)具体包括如下步骤：

a、将所述菌悬液转种到所述血液增菌肉汤管，同时转种到所述分离平皿，分别传代培养，所述传代培养为在35±1℃条件下培养18-24h，所述分离平皿中形成菌落；

b、观察所述分离平皿中的菌落，若所述菌落单纯无污染，说明本次传代合格，若所述菌落有污染，则重新进行本次传代，直到所述菌落无污染为止；

c、将所述血液增菌肉汤管和分离平皿分别编号为A₁和B₁；

将所述A₁血液增菌肉汤管中的菌悬液按照所述步骤a和b进行传代，并将转种的血液增菌肉汤管和分离平皿分别编号为A₂和B₂；

将所述A₂血液增菌肉汤管中的菌悬液按照所述步骤a和b进行传代，并将转种的血液增菌肉汤管和分离平皿分别编号为A₃和B₃；

将所述A₃血液增菌肉汤管中的菌悬液按照所述步骤a和b进行传代，并将转种的血液增菌肉汤管和分离平皿分别编号为A₄和B₄；

按照上述方法连续传代30次，最后一次传代的血液增菌肉汤管和分离平皿分别编号为A₃₀和B₃₀。

6.根据权利要求5所述使产ESBLs的多重耐药菌敏感性恢复的方法，其特征在于，所述步骤(4)具体包括如下步骤：

将步骤(3)得到的A₃₀血液增菌肉汤管中的菌悬液转种到血培养皿中进行分离培养18-24h，产生典型菌落，对所述典型菌落进行药敏试验，同时与所述原始菌株的药敏进行比较，得出血液增菌肉汤管传代培养得到的细菌的药物敏感性恢复情况。