[发明专利]一种猪支原体肺炎疫苗株的应用

说明书

技术领域

本发明属于兽用生物制品领域，涉及一种新的猪支原体肺炎疫苗株的应用。

背景技术

猪支原体肺炎又称猪地方性流行肺炎(Swine enzootic hyopneumoniae)，我国俗称猪喘气病，是由猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae)引起的一种慢性、接触性、呼吸道传染病。主要临诊症状是咳嗽和气喘，常有其他病菌(如多杀性巴氏杆菌、副猪嗜血杆菌、猪胸膜肺炎放线杆菌等)继发感染。本病广泛分布于世界各地，在我国许多地区的猪场都有发生。由于带菌病猪的存在和分布较广，通常会引起猪群生产性能显著下降，受感染猪群日增重下降，饲料报酬降低，上市时间延迟，猪群生长均匀度较差，药物治疗成本增加，因而给猪场造成较为严重的经济损失。由国内外临床经验可知，接种疫苗，能够显著的降低猪肺炎病变程度，降低饲养成本，是一种比较可行的预防方法。

为了减少猪支原体肺炎对养猪业造成的损失，国内外许多学者进行了广泛研究，并取得了一定的成果。目前，国内自主研发的猪支原体肺炎疫苗只有弱毒疫苗，该疫苗由于需要胸腔接种，所以不易于推广普及，而国外已有多家兽药公司研发生产了猪支原体肺炎灭活疫苗，并在国内市场上销售，灭活疫苗可以通过肌肉注射进行接种，易于操作。由于国内无自主研发的猪支原体肺炎灭活疫苗，市场上均依赖进口，可进口疫苗价格较为昂贵。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种猪支原体肺炎疫苗株的应用，该疫苗株用于猪肺炎支原体感染引发疾病的预防用兽用生物制品或兽药。本发明的灭活疫苗所用的菌株是从国内商品猪上分离得到的，对商品猪具有良好的免疫原性；本发明的灭活疫苗制备工艺简单，安全有效，能够有效预防猪支原体肺炎疾病的发生。

本发明所述的一种猪肺炎支原体疫苗株的应用，该猪支原体肺炎疫苗株在制备治疗猪支原体肺炎的兽药中的应用，将疫苗株接种培养基培养，收获培养物，经甲醛溶液灭活与佐剂混合制成，具体操作按下列步骤进行：

a、生产用种子制备：从菌种库中取出生产种子，用改良Friis液体培养基溶解，并按1∶10继代于改良Friis液体培养基中，放入温度36-38℃恒温培养箱中培养48-72小时，待菌液颜色发生改变，pH值降低至6.70-6.80时收取菌液，纯粹检验合格，作为一级种子液，再重复制备二级种子液和三级种子液；

b、制苗用菌液制备：将步骤a得到的三级种子液按1∶10加入改良Friis液体培养基中，密闭发酵罐罐口，通入无菌空气，罐内压力达到0.08MPa时，关闭发酵罐上所有进出口，保压，温度36-38℃培养2-3天，pH值降低至6.70-6.80时取样，进行纯粹检验和含菌量测定；

c、灭活：按步骤b中制备菌液总量的0.2％加入甲醛溶液，在温度36-38℃灭活2小时，再将灭活的菌液置温度2-8℃保存；

d、配苗：将步骤c中灭活的菌液与免疫佐剂混合，即得到猪支原体肺炎灭活疫苗，再将疫苗无菌定量分装后，加盖密封，粘贴标签，置温度2-8℃保存。

步骤a和步骤b中的改良Friis液体培养基是由基础培养基为PPLO肉汤粉3.0-5.0g、脑心浸液粉2.0-4.0g、去离子水660-740.0ml，辅助培养基为10×汉克氏平衡盐溶液20-40.0ml、酵母浸出液20-40.0ml、青霉素100-300U/ml、杆菌肽粉5-20U/ml、0.25％酚红5-10.0ml和灭活的猪血清100-250.0ml混合制成。

步骤d中所述的免疫佐剂为氢氧化铝胶、MONTANIDE ISA 206、ISA 11R、ISA 760、ISA 563或Gel 01。

本发明所述的猪支原体肺炎疫苗株的应用，所述的猪支原体肺炎疫苗株，于2010年在新疆昌吉某猪场分离鉴定获得的一株猪支原体肺炎疫苗株。其分类命名为猪肺炎支原体，菌株号为CJ株，已于2014年11月06日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.9909。

本发明所述的改良Friis固体培养基是由基础培养基为PPLO肉汤粉3.0-5.0g、脑心浸液粉2.0-4.0g、去离子水660-740.0ml和琼脂粉10-15.0g，辅助培养基为10×汉克氏平衡盐溶液20-40.0ml、酵母浸出液20-40.0ml、青霉素100-300U/ml、杆菌肽粉5-20U/ml、0.25％酚红5-10.0ml和灭活的猪血清100-250.0ml混合制成。

本发明所述的猪支原体肺炎疫苗株的应用，其有益效果为：