[发明专利]口服胎盘肽壳聚糖‑海藻酸钠缓释微囊的制备工艺

说明书

技术领域

本发明涉及医药领域，尤其涉及一种口服胎盘肽壳聚糖-海藻酸钠缓释微囊的制备工艺。

背景技术

近年来研究发现，胎盘肽对机体具有较高的免疫和生理调节作用^[1-10]，对病毒性传染病、真菌感染、免疫缺陷等疾病的辅助治疗有良好的效果^[11]；由于多肽的分子结构不稳定，半衰期短，在口服给药过程中，易被胃肠道中大量的蛋白分解酶降解，失去活性，致使该类药物在给药方面受到限制。随着生物技术的不断发展，越来越多的多肽类药物被发掘，多肽类药物的口服给药问题已成为医药领域的焦点问题。

发明内容

本发明的目的在于，克服现有口服多肽类药物微囊制备技术的不足之处，提供一种以壳聚糖、海藻酸钠为壁材、以胎盘多肽为芯料，采用W╱O╱W乳化凝胶-外部交联技术，制备口服胎盘肽壳聚糖-海藻酸钠缓释微囊的工艺，试验结果显示：该工艺制备的微囊，成形性较好，微囊的包封率及载药量较高、粒径较小、体外模式肠液释药试验显示：胎盘肽壳聚糖-海藻酸钠微囊具有良好的缓释性能，能较好的提高多肽药物的稳定性，有望成为口服蛋白多肽类药物的缓释载体，现将口服胎盘肽壳聚糖-海藻酸钠缓释微囊的制备方法及工艺条件介绍如下：

1、口服胎盘多肽壳聚糖-海藻酸钠缓释微囊制备工艺

1.1、仪器与设备

HL-4数显恒温磁力搅拌器；可见光紫外分光光度仪；真空干燥器；LD52A型离心机；H1-4电泳仪；光学显微镜；1%₀电子分析天平；HS2060型超声提取器。

1.2、药物与试剂

海藻酸钠；壳聚糖；胎盘多肽，胸腺肽α1，六磷酸肌醇溶液，十二烷基硫酸钠液，植物油；山梨糖醇酐油酸酯（Span-80）；氯化钙(CaCI₂ ) 正丁醇、石油醚、异丙醇等试剂均为分析纯。

1.3、多肽微囊制备方法

1.3.1 溶液配制

水相的制备：精密称取海藻酸钠2g，搅拌溶解于六磷酸肌醇溶液中，配制成2.0%海藻酸钠六磷酸肌醇溶液100ml（W／V）, 精密称取胎盘肽0.4g，超声溶解于2.0%海藻酸钠六磷酸肌醇溶液中，静止放置除去气泡，得胎盘多肽-海藻酸钠混合溶液，作为乳化过程中的水相。

油相的制备：取精密量取植物油100ml，置三颈瓶中，用1%乙酸调节pH值至5.0，水浴加热至35℃，搅拌（400r·min^-1）下加入span80 0.8g,分散均匀，得0.8% span80植物油溶液，作为油相。

胶联剂的制备：精密称取壳聚糖0.6g，在搅拌下溶于1%乙酸100ml溶液中（25℃），配制成0.6%壳聚糖溶液100ml（W／V），用1%氢氧化钠调节pH值至5.6，精密称取氯化钙1g, 超声溶解于0.6%壳聚糖溶液100ml中，分别用0.4nm、0.22nm滤膜滤过，得壳聚糖-氯化钙混合溶液，作为胶联剂。

1.3.2 多肽微囊的制备

①取一定量的0.8% span80植物油溶液，水浴加热至30℃，在搅拌下（800r.min^-1），缓慢加入（2ml.min^-1）胎盘多肽-海藻酸钠混合溶液, 油相与水相比例1∶4 （V／V），乳化30min，形成W／O初乳；低温放置120min，除去气泡；

②取W／O初乳，在搅拌下（800r.min^-1）缓慢加入（2ml.min^-1）壳聚糖-氯化钙混合溶液中，水浴加热至30℃，搅拌乳化30min，W／O／W复乳形成，静止孵化进行固化；

③将复乳移入分液漏斗中，分别用石油醚、异丙醇充分洗脱、离心，弃去上层油相，再用蒸馏水洗脱，离心，弃去上层水相，得凝胶状微粒；

④取固化后的凝胶状微粒分摊于铝薄上，置真空干燥器中干燥2h；

⑤取干燥后的微粒，在搅拌下（60r.min^-1）缓慢放入0.4%壳聚糖溶液中，搅拌下孵化120min进行二步胶联，取出微粒，在搅拌下（60r.min^-1）放入正丁醇溶液中，离心取出分别用异丙醇、石油醚、纯净水反复洗脱，离心弃去上层油相和水相；

⑥将固化后的微粒分摊于铝薄上，置真空干燥器中干燥。

2、微囊的制备主要技术条件：