[发明专利]一种微生物发酵生产氨基葡萄糖的菌株及方法

权利要求书

1.一种微生物发酵生产N-乙酰-D-氨基葡萄糖和D-氨基葡萄糖的菌株，其特征在于，已保藏于中国微生物菌种保藏委员会普通微生物中心，一种枯草芽孢杆菌NJ090259菌株，保藏号为CGMCC10257，保藏日期为2014年12月29日。

2.一种微生物发酵生产N-乙酰-D-氨基葡萄糖的方法，其特征在于，利用权利要求1所述的枯草芽孢杆菌NJ090259菌株作为出发菌种，经种子培养和已优化的培养基发酵产生N-乙酰-D-氨基葡萄糖，包括以下步骤：

（1）菌株筛选、鉴定与培养

采集50份土壤样品，稀释后涂布于初筛平板，采用初筛培养基：胶体几丁质2.5g/L，磷酸氢二钾0.7g/L，磷酸二氢钾0.3g/L，硫酸镁0.5g/L，硫酸亚铁0.01g/L，琼脂20g/L，pH7.0，培养温度37℃，培养时间72h，进行培养，得到单菌落，分离菌落，得到枯草芽孢杆菌，并对其进行摇瓶发酵培养，测定发酵液几丁质酶活力，并根据发酵液含几丁质酶活力筛选菌株；

（2）发酵培养

将在平板培养基上活化后的枯草芽孢杆菌NJ090259接入种子培养基中，恒温摇床培养，用作种子液，接入发酵培养基中，恒温摇床培养，离心取上清液，测定N-乙酰-D-氨基葡萄糖含量；

平板培养基：胶体几丁质30g/L，硫酸铵2g/L，磷酸二氢钾1.0g/L，硫酸镁0.5g/L，氯化钠0.5g/L，琼脂20g/L，pH6.5；

种子培养基：蛋白胨5.0g/L，牛肉膏5.0g/L，氯化钠5.0g/L，pH7.0-7.2；

发酵培养基：胶体几丁质10g/L，葡萄糖10g/L，酵母膏3.0g/L，MgSO₄·7H₂O0.6g/L，FeSO₄·7H₂O0.01g/L，KH₂PO₄0.4g/L，K₂HPO₄0.6g/L，ZnSO₄0.001g/L；

发酵条件：温度35℃，发酵时间18h，起始pH6.5，接种量10%，装液量50ml/250ml；

（3）N-乙酰-D-氨基葡萄糖发酵液纯化

将由培养基离心获得的上清液，电渗析除盐，将除盐后发酵液真空加热，浓缩至过饱和，对浓缩后的发酵液进行降温，并加入5倍无水乙醇，搅拌离心，得到高纯度N-乙酰-D-氨基葡萄糖结晶。