[发明专利]一株类芽孢杆菌及其在陈皮防腐耐储存中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，具体涉及一株类芽孢杆菌及其在陈皮防腐耐储存中的应用。

背景技术

类芽孢杆菌广泛地存在于自然界，具有繁殖快速、代谢快、四小时增殖10万倍，标准菌四小时仅可繁殖6倍。该属细菌的重要特性是能够产生对不利条件具有特殊抵抗力的芽孢，无湿状态可耐低温－60℃、耐高温+280℃，耐强酸、耐强碱、抗菌消毒、耐高氧（嗜氧繁殖）、耐低氧（厌氧繁殖）。类孢杆菌体积比一般病源菌分子大四倍数，占据空间优势，抑制有害菌的生长繁殖。同时它们对有机质分解力强，增殖的同时，会释出高活性的分解酵素，将难分解的大分子物质分解成可利用的小分子物质，产生丰富的代谢生成物，合成多种有机酸、酶、及抑菌物质，抑制有害菌的生长。随着现代生物技术的快速发展有关芽孢杆菌及类芽孢杆菌应用于实际生产上的报道越来越多。

陈皮是我国传统中草药之一，具有行气健脾，燥湿化痰的功效，常用于治疗胸脘胀满，食少吐泻，咳嗽痰多等症状。一般陈皮保存时间越长药用功效越显著，但长期储藏陈皮会发霉甚至腐烂。近年来，国内对陈皮的研究主要集中于化学成分、药理作用等方面，但对陈皮的防腐耐储存研究较少，而将有益微生物应用于陈皮的生产当中，可能对陈皮防腐与风味的维持发挥一定的作用。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一株可高效利用柠檬酸盐的泰国类芽孢杆菌菌株Paenibacillus thailandensis HNCP20。

本发明的另一目的是提供上述菌株在陈皮防腐耐储存中的应用。

本发明的另一目的是提供上述菌株在制备陈皮防腐菌剂中的应用。

本发明的另一目的是提供上述菌株在制备转化柠檬酸盐的接种剂中的应用。

本发明的目的通过以下技术方案予以实现。

一株泰国类芽孢杆菌(Paenibacillus thailandensis)HNCP20，所述菌株于2014年12月25日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），菌种保藏号为CGMCC No.10245。

所述菌株的16S rDNA序列如SEQ ID NO:1所示。

所述菌株呈杆状，产芽孢，所述菌株细胞呈杆状，产芽孢，耐pH 3~pH 10，耐NaCl的浓度达3.0%。所属菌株在LB琼脂平板中呈米黄色不透明，菌落为圆形凸起，菌落直径3~6mm。所述菌株在平板上生长速度较快，最适生长温度是37℃、pH生长范围较广，最佳生长pH为6~8。通过生理生化特性测定，显示该菌兼性厌氧，甲基红反应呈阴性，V.P反应呈阴性，过氧化氢酶阳性，不能液化明胶，淀粉水解阳性。菌株在柠檬酸钠培养基上具有明显较强的利用柠檬酸盐能力。能在以香草酸、组氨酸、糊精、乌头酸、丁二胺、羟基苯乙酸、γ-氨基丁酸、L-谷氨酰胺、柠檬酸钠、肌苷、L-丙氨酸、精氨酸、L-阿糖醇、琥珀酸钠、天冬氨酸、D-木糖、水杨酸钠、酪氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸为碳源的培养基上生长；对300μg/mL氨苄青霉素及四环素有耐受性，对50μg/mL的红霉素有耐受性；而对卡拉霉素、氯霉素、新霉素、链霉素庆大霉素的耐受性差，低浓度（5 mg/ml）的这几种抗生素就能抑制其生长。

所述菌株在陈皮防腐耐储存中的应用。所述菌株通过转化桔子皮中的柠檬酸盐，对陈皮的防腐耐储存具有显著的作用。

所述菌株在制备陈皮防腐菌剂中的应用。

所述菌株在制备转化柠檬酸盐的接种剂中的应用。

优选地，将所述菌株制成菌悬液喷施于桔子皮。

优选地，制备得到的菌悬液细胞密度为OD₆₀₀=1，所述菌悬液与桔子皮的体积质量比为1:10（mL/g）。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

（1）本发明筛选获得一株泰国类芽孢杆菌HNCP20，具有较强利用柠檬酸盐的能力，经所述菌株处理过的桔子皮具有明显的防腐耐储存能力，可用于制备陈皮防腐菌剂及制备转化柠檬酸盐的接种剂。

（2）筛选得到的泰国类芽孢杆菌HNCP20生长速度快、对环境适应性强、抗逆性强，可耐pH 3~pH10，耐NaCl的浓度可达3%，对300μg/mL氨苄青霉素及四环素有耐受性，对50μg/mL的红霉素有耐受性。

附图说明

图1为从陈皮中分离菌株IS-PCR指纹电泳图谱；注：cp01~23代表分离纯化得到的23株菌株；a-类群Ⅰ；b-类群Ⅱ和Ⅳ；c-类群Ⅲ。