[发明专利]用于检测SCZ相关基因多态性的引物及试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种预测精神分裂症易感性的试剂，具体涉及基于PCR-RFLP方法的用于检测与精神分裂症易感性相关的人VRK2基因单核苷酸多态性的引物以及含有该引物的试剂盒。

背景技术

精神分裂症(SCZ)是一种病因不明、复发率高且常见的重型精神障碍，多发病于青壮年时期。常缓慢起病，以感知觉、思维过程、情感活动、行为等多方面的障碍以及伴随精神活动的不协调为特点，一般不会伴有智力和意识障碍。容易复发是本病的特征之一，且每一次复发会进一步损害患者的预后，多次发病后病情会不断恶化，但有部分病人也可以保持痊愈或基本痊愈状态，部分病人严重退化，丧失工作能力和生活能力。精神分裂症作为最常见、最严重的精神疾病，具有发病率低但相对患病率高的特征。精神分裂症全球终身患病率在3.8‰～8.4‰，美国研究结果表明其终身患病率为13‰。2011年世界卫生组织(WHO)精神卫生报告结果显示：精神疾病负担约占全球疾病的总负担为8‰，已成为全球公共性卫生的重大问题。

精神分裂症被称为最复杂的人类疾病，一些学者通过家系、双生子和寄养子的研究发现：遗传是精神分裂症的发病重要因素，遗传度高达70％～85％。随着当前数据处理信息化程度的提高和分子生物学技术的进步，疾病的分子遗传学研究已步入一个全新的阶段。一些应用基因组扫描方法研究的结果发现19号染色体、21号染色体和Y染色体以外，余下染色体上都有可能存在精神分裂症致病基因。其中报道较多阳性区域：1号染色体(q21-22、p21.2-31.2和q32-42)、2号染色体(p13-14)、4号染色体(p16)、5号染色体(q22-35)、6号染色体(q13-26和p24-22)、7号染色体(q22)、8号染色体(p22-21)、10号染色体(p11-15)、13号染色体(q14-33)、15号染色体(q13-15)、18号染色体(p11-q12)、22号染色体(q11-13)和X染色体。除了精神分裂症发病假说中相关的候选基因以外，其它研究发现的与精神分裂症发病或者症状相关的基因，如L型钙离子通道α1C亚基(CACNA1C)基因和G蛋白β亚基1样蛋白(GNB1L)基因等。

迄今，随后基因组的计划不断向前发展，精神疾病分子遗传学的研究也紧跟快速发展，而且不断有研究报道新的候选基因，从目前的研究来看，SCZ的易感基因很多，但是关于位于7号染色体的VRK2基因rs3732136位点多态性与SCZ的关系未见报道。

发明内容

本发明的目的在于提供用于检测SCZ相关基因多态性的引物及试剂盒。

为实现上述目的，本发明采用了以下技术方案：

通过提取人基因组DNA，测定受试者的VRK2基因(NC_000002.12)3’UTR区rs3732136位点的基因型，发现该位点的单核苷酸多态性与受试者对精神分裂症的易感性密切相关：VRK2基因型为T/T纯合子时，受试者的易感性最高；VRK2基因型为T/C杂合子时，受试者的易感性较高；VRK2基因型为C/C纯合子时，受试者的易感性最低。

根据以上发现，本发明提供了一种分离核酸，具有SEQ.ID.NO.1所示的碱基序列，在第178位为C，该核酸序列为VRK2基因3’UTR区部分序列。本发明提供一对引物，具有SEQ.ID.NO.2和SEQ.ID.NO.3所示的碱基序列，长度为分别为18bp和22bp，而且可以特异性地扩增出含有SEQ.ID.NO.l所示序列中第178位SNP的扩增产物，所述的引物分别为：

正义引物F1：CTCTGAAGATGATACCAA(如SEQ.ID.NO.2所示)；

反义引物R1：TATGACACTATTCTATGACACT(如SEQ.ID.NO.3所示)。

本发明提供了一种检测SCZ易感性的诊断试剂盒，其中包含有引物对F1和R1以及用于PCR扩增检测的试剂盒的其他试剂、缓冲液等。检测扩增产物与SEQ.ID.NO.l序列第178位相互对比是否存在变异时，所需的化学试剂还包括限制性内切酶等。本发明试剂盒中的全部组分、含量、来源如下：

所述诊断试剂盒(试剂盒的保存温度为-20℃)供10人份检测应用，其组分、含量和来源包括：

125μL 2×PCR MasterMix(RUNDE)；

10μmol/μL Fl(SEQ.ID.NO.2)和10μmol/μL R1(SEQ.ID.NO.3)各10μL；

1.5mL纯水；

20μL 10×限制性内切酶反应缓冲液(Fermentas)；