[发明专利]一种从猪肺中提取肝素的生产方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物医药领域，尤其涉及一种从猪肺中提取肝素的生产方法。

背景技术

肝素，是酸性粘多糖硫酸酯类抗凝血药。近年来研究证明肝素还有降血脂作用，多年来，国际市场对肝素的需求一直十分旺盛。因肝素是从动物内脏中提取加工而得的，产量受到一定限制，时常满足不了市场需求。自20世纪90年代后期开始，全球市场肝素需求大幅增加，我国肝素生产和出口连年均以较大幅度上升,出口量和出口金额呈快速增长态势。中国已成为世界上首屈一指的肝素原料药出口大国。2001年，全国肝素产品出口金额为4460万美元。2002 年，出口金额达5894万美元，比上年增长了32.17 %。肝素产品在我国医药类产品出口金额排序中已跻身前5位,仅次于维生素 C、柠檬酸、维生素 E 和磺胺。

我国生产的肝素产品除满足国内市场外，还大量出口。长期以来,我国产品出口顺畅，只要质量达到要求，常常有多少就出口多少。与之形成对比的是，由于我国的经济发展状况和人民生活水平的限制,，对这种昂贵(注射用精品8～10美元/mega, 口服用为7～8美元/mega) 的抗凝血药目前国内消费量极小, 主要是创汇，销往日本、美国、欧洲等发达国家和地区。

目前，国内生产肝素的方法，主要是盐解法和酸解法，比如公开号为CN101735340A、CN101649008A、CN101519459A等等的中国发明申请，这两种方法都是采用猪小肠粘膜为原料，在碱性条件下通过盐解、酶解， 出去部分蛋白质后，通过三甲胺季铵性强碱性阳离子交换树脂吸附剂洗脱，在洗脱液中加以乙醇沉淀既得肝素钠初级原料出售，其缺点是生产周期长达48h，反应温度为95-100℃，能源消耗大，水解不完全，收率低，生产1亿国际单位（IU）肝素粗品需2800-3000根猪小肠粘膜，所得产品纯度低，粗品含肝素至多为 80效价/毫克；并产生大量的肥肠渣和废水，污染环境；且生产过程中树脂再生困难，这种制备方法由于生产周期长，水解不完全、不彻底，制得的肝素钠纯度低、收率低、效价低，很难进行规模性生产，且不能满足市场的大量需求。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足之处，提供一种产品生产周期短、纯度高、效价高、杂质少、绿色环保的利用猪肺提取肝素粗品的生产方法， 本工艺采用生物酶解法从原材料易得的猪肺中提取肝素粗品。

本发明实现目的的技术方案如下：

一种从猪肺中提取肝素的生产方法，其特征在于：步骤如下 ：（1）预处理：将猪肺清洗，去除内外污物和脂肪后，绞碎成糜状，并在充分搅拌下，加入水搅拌得到猪肺混合液，其中猪肺和水的质量比为1：3-4；（2）酶解：调猪肺混合液pH值为6.5～8.0，加入猪肺重量的1.5％～2.5%的硫酸软骨素复合酶，搅拌均匀，升温至 30～45℃，保温反应30～60min后，保持反应液的pH 值为7.0～7.5，加入猪肺重量的 0.25％～0.5%胰蛋白酶，搅拌均匀，保温2～4h，继续升温到 90～100℃，保持5～10min，冷却，得到猪肺酶解液（3）除蛋白：过滤猪肺酶解液，去除表面油脂层，调滤液pH值为8.5～10.5，搅拌升温到55～65℃时加入猪肺重量的 0.1%～0.4％的澄清剂，继续升温至90～95℃，保温反应2～4h，冷却至常温；（4）超滤：将上述液体用0.2～0.4μm滤膜进行过滤，得过滤液；（5）氧化沉淀：加入双氧水，使过滤液中双氧水的含量为10～30g/kg，常温反应8～12h过滤，得滤液，将滤液调pH至4.5～5.5，加入等体积的无水乙醇沉淀过夜后，除去上层清液，沉淀物为粗品肝素；（6）冷冻干燥：将粗品肝素放入真空冷冻干燥箱内，设定温度-20～10℃，真空度0.05～0.08Mpa，干燥时间2～4h。

所述的一种从猪肺中提取肝素的生产方法，其特征在于：所述步骤（2）硫酸软骨素复合酶为硫酸软骨素酶A、B和C中二种或以上的组合。

所述的一种从猪肺中提取肝素的生产方法，其特征在于：所述步骤（3）澄清剂为天然1+1澄清剂，使用之前用冰醋酸配成1%的溶液。

所述的一种从猪肺中提取肝素的生产方法，其特征在于：所述步骤（5）调pH值所用的酸为冰醋酸、草酸、柠檬酸中的一种或者二种混合。