[发明专利]一种抗生素残留检测试剂盒及其应用

说明书

技术领域

本发明属于食品安全快速检测技术范围，主要是用于肉、蛋、水产品、及蜂蜜中的β－内酰胺类类、四环素类、大环内酯类和氨基糖苷类抗生素残留微生物抑制试验方法的试剂盒产品。

背景技术

在食品安全中，药物残留倍受关注。近30年来，兽药在畜牧业、水产养殖业的应用日益广泛，其在降低发病率与死亡率、促生长、提高饲料利用率和产品品质方面的作用是十分显著的。β－内酰胺类、大环内酯类、氨基糖苷类和四环素类就是四类历史悠久，重要常用的抗微生物药物。但是，兽药的使用无疑会导致动物体内药物的滞留蓄积，并以残留的方式进入人体及生态系统。兽药残留对人类及环境的危害主要是慢性、远期和累积性的，如致癌、发育毒性、体内蓄积、免疫抑制、致敏和耐药菌株等。近年来，随着我国加入WTO，技术性的贸易壁垒日显突出。由于在养殖过程中，仍存在滥用药物，或使用不明成分药物等现象，而以针对性项目开展检测的模式就易造成疏漏。2003年初，日本就在我国出口烤鳗中检出恩诺沙星，并进一步按食品卫生法中“动物源性食品中不得含有合成抗生素”的规定对我国出口动物源性食品设置门槛。这一事件无疑对兽药残留检测工作提出了新的更高的要求。

有关文献或方法中四类抗生素药物残留的检测方法均是基于每一类药物的分别检测，分析方法包括色谱法、色/质联用法、薄层色谱、免疫测定法和微生物抑制法等。为了适应国外日益严格的要求，以及市场和进出口快速通关的需求，针对这四类常用的抗生素制定快速过筛的微生物抑制法有其重要的意义。微生物抑制法快速、简便，传统上，一直被用于对大批量的样品进行抗生素过筛，时至今日仍然被广泛使用。微生物抑制法可进行抗生素大类的筛选，可检测不同基质的多种样品，样品前处理简单，检测时间短，而且不需要昂贵的检测仪器和试剂，能适应国际贸易交货时间短、规格多的商品检验特点。本研究主要是针对β－内酰胺类、大环内酯类、氨基糖苷类和四环素类的快速筛选微生物抑制方法。目前，已制订发布了出入境检验检疫行业标准《动物源性食品中抗生素类药物残留检测方法微生物抑制法》(标准号：SN/T 1750-2006，本试剂盒方法就是在此标准的基础上研发，将该标准中使用到的菌种、培养基、标准品等实验材料进行制备并组装成试剂盒，为使用者节省了菌悬液制备、标准品配制等繁琐的准备过程，节约了时间，使得试剂盒方法使用简便。

发明内容

本发明的目的在于提供一种抗生素残留检测试剂盒及其应用，将使用到的菌种、培养基、标准品等实验材料进行制备并组装成试剂盒，为使用者节省了菌悬液制备、标准品配制等繁琐的准备过程，节约了时间，使得试剂盒方法使用简便。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

所述试剂盒由检测用培养基、检测用菌、对照用抗生素标准纸片、检测用滤纸片组成；所述检测用培养基包含抗生素5号培养基干粉、抗生素8号培养基干粉；所述检测用菌包含藤黄微球菌菌悬液、枯草芽胞杆菌芽孢悬液、蜡样芽胞杆菌蕈状变种芽孢悬液；所述对照用抗生素标准纸片包含土霉素标准纸片、红霉素标准纸片、卡那霉素标准纸片。

所述抗生素5号培养基成分及质量比为牛肉膏：酵母膏：蛋白胨：琼脂=1:2:4:10，具体为各成分及含量为牛肉膏1.5g、酵母膏3.0g、蛋白胨6.0g、琼脂15.0g、蒸馏水1000mL，培养基pH7.9±0.1，将上述除蒸馏水外各成分完全混合均匀，准确称取混合物2.55克，分装到5mL的塑料瓶中，密封，4℃保存。

所述抗生素5号培养基成分及质量比为牛肉膏：酵母膏：蛋白胨：琼脂=1:2:4:10，所述抗生素8号培养基具体各成分及含量为牛肉膏1.5g、酵母膏3g、蛋白胨6g、琼脂15g、蒸馏水1000mL，培养基pH6.85±0.05，将上述除蒸馏水各成分完全混合均匀，准确称取混合物2.55克，分装到5mL的塑料瓶中，密封，4℃保存。

所述藤黄微球菌菌悬液为藤黄微球菌(Micrococcus Luteus )ATCC9341菌悬液，菌悬液浓度为3.0×10^７ＣＦＵ/mL；所述枯草芽胞杆菌芽孢悬液为枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)　ATCC6633芽孢悬液，菌悬液浓度为3.0×10^７ＣＦＵ/mL；所述蜡样芽胞杆菌蕈状变种芽孢悬液为蜡样芽胞杆菌蕈状变种(Bacillus cereus Var. mycoides)ATCC11778芽孢菌悬液，菌悬液浓度为3.0×10^７ＣＦＵ/mL。