[发明专利]转基因苜蓿草J163品系特异性环介导等温扩增检测用引物及检测方法和应用

权利要求书

1.组转基因苜蓿草J163品系特异性环介导等温扩增检测用引物，其特征在于，所述引物为F3、B3、FIP、BIP、LF和LB，所述引物的序列分别如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6所示。

2.权利要求1所述转基因苜蓿草J163品系特异性环介导等温扩增检测用引物在鉴别转基因苜蓿草J163品系与其他作物方面的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述其他作物为转基因玉米品系MIR162、转基因玉米品系89034、转基因玉米品系BT11、转基因大米cry IA(a/b)、非转基因油菜籽、非转基因小麦或非转基因大叶苜蓿。

4.一种转基因苜蓿草J163品系特异性环介导等温扩增检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1.提取DNA作为反应的模板；

S2.采用权利要求1所述引物F3、B3、FIP、BIP、LF和LB进行LAMP检测，根据检测结果进行判断；

其中，S2所述环介导等温扩增检测的反应体系为25μL：10×Thermopol buffer2.5 μL、10μM 的F3和10μM 的B3各0.5μL、40μM 的FIP和40μM 的BIP各1μL、40μM的 LF和40μM的LB各0.5μL、10 mM 的dNTPs4μL、100 mM 的MgSO₄ 1μL、8 U/μL 的Bst DNA polymerase 1 μL、Template DNA1μL 和11.5μL ddH₂O；

S2所述检测的反应程序为63℃恒温反应60min，85℃加热2min使酶失活，反应即结束；

根据检测结果进行判断的方法为：

方法一：根据颜色变化进行结果判断：向反应终体系加入0.2μLSYBR green I，1min观察结果，阳性反应呈现黄绿色，而阴性的反应保持橙色；

或者，方法二：电泳检测判断：经过1.5%琼脂糖电泳检测，阳性反应的产物呈梯形条带，阴性反应没有梯形扩增条带出现。

5.根据权利要求4所述转基因苜蓿草J163品系特异性环介导等温扩增检测方法，其特征在于，S2所述环介导等温扩增检测反应体系中MgSO₄终浓度为2mM。

6.权利要求4所述转基因苜蓿草J163品系特异性环介导等温扩增检测方法的应用，其特征在于应用于鉴别转基因苜蓿草J163品系与其他作物。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述其他作物为转基因玉米品系MIR162、转基因玉米品系89034、转基因玉米品系BT11、转基因大米cry IA(a/b)、非转基因油菜籽、非转基因小麦或非转基因大叶苜蓿。