[发明专利]一种基于DNA酶检测钾离子浓度的方法

权利要求书

1.一种基于DNA酶检测钾离子浓度的方法，包括下述：

(1)配制标准溶液DNA酶体系

用含钠离子的缓冲液溶解可溶性钾盐配置多个浓度梯度的钾离子溶液，分别向每个浓度梯度的钾离子溶液中加入DNA，得到多个DNA含量相同的钾离子-DNA体系；所述多个DNA含量相同的钾离子-DNA体系反应后，得到多个构象不同的DNA G-四链体的体系，分别向各个所述DNA G-四链体的体系中加入氯化血红素，得到氯化血红素含量相同的多个DNA G-四链体-氯化血红素体系，所述多个DNAG-四链体-氯化血红素体系反应后，得到多个标准溶液DNA酶体系；所述DNA为能够形成G-四链体的DNA；

(2)配制待测溶液DNA酶体系

将待测样品加入到所述含钠离子的缓冲液，得到待测样品溶液，向所述待测样品溶液中加入所述DNA，得到待测样品-DNA体系，所述待测样品-DNA体系中所述DNA的含量与所述多个DNA含量相同的钾离子-DNA体系中所述DNA的含量相同；所述待测样品-DNA体系反应后，得到DNA G-四链体的体系，向该体系中加入氯化血红素，反应后，得到DNA G-四链体-氯化血红素体系，所述DNA G-四链体-氯化血红素体系中的氯化血红素含量与所述多个DNA G-四链体-氯化血红素体系中的氯化血红素含量相同；所述DNA G-四链体-氯化血红素体系反应后，得到待测溶液DNA酶体系；

(3)标准溶液及待测溶液的配制

将2,2′-联氨-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二胺盐ABTS溶液与H₂O₂混合，得到混合液，将该混合液称为底物溶液，向所述多个标准溶液DNA酶体系中的每一个标准溶液DNA酶体系中加入所述底物溶液进行反应，得到多个标准溶液样本；向所述待测溶液DNA酶体系中加入所述底物溶液进行反应，得到待测溶液样本；

(4)标准曲线的制备

测量所述多个标准溶液样本在420nm处的吸光度，绘制钾离子浓度与吸光强度值的标准曲线；

(5)待测样本检测

测量所述待测溶液样本在420nm处的吸光度，根据所述标准曲线，得到所述待测样品中钾离子的浓度。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述(1)中，所述含钠离子的缓冲液通过下述至少一种缓冲液制备得到：三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液、硼酸-硼砂缓冲液、三乙醇胺缓冲液、咪唑-盐酸缓冲液、双甘氨肽缓冲液、2-氨基-2-甲基-1-丙醇缓冲液、磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液；

所述含钠离子的缓冲液的pH值为6.2-8.2。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述能够形成G-四链体的DNA选自下述至少一种：GGGCCAGGGAGCGGGGCGGAGGGGG、AGGGTTAGGGTTAGGGTTAGGG和TTAGGGTTAGGGTTAGGGTTAGGG。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于：所述(3)中，所述混合液中的2,2′-联氨-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二胺盐与H₂O₂的摩尔浓度比为0.1～50；

所述标准溶液样本中的钠离子浓度为大于0小于等于30mmol/L；

所述标准溶液样本中的DNA分子的浓度为0.01μmol/L～10μmol/L；

所述标准溶液样本中氯化血红素的浓度可为0.01μmol/L～10μmol/L。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其特征在于：所述(2)中，所述待测样品为人或动物体液。