[发明专利]一种双特异性抗体CD19×CD3的构建及应用

说明书

本发明提供了一种双特异性抗体，本申请的双特异性抗体由单链单元和单价单元组成，其中该单价单元针对免疫细胞的表面抗原CD3具有特异性结合能力，该单链单元针对肿瘤细胞表面抗原CD19具有特异性结合能力；该单链单元包含与Fc片段融合的单链可变片段(ScFv)，该单价单元包含轻链和重链对。本申请还提供双特异性抗体的制备方法，这些抗体的药学用途。

技术领域

本发明涉及免疫学的技术领域。具体地说，涉及双特异性抗体的构建和制备方法。

背景技术

双特异性抗体(bispecific antibody，BiAb)是含有两种特异性抗原结合位点的人工抗体，能在靶细胞和功能分子(细胞)之间架起桥梁，产生导向性的效应功能。 BiAb在生物医学中，特别是在肿瘤的免疫治疗中具有广阔的应用前景。通过BiAb介 导细胞毒作用杀死肿瘤细胞是当前免疫治疗应用研究的热点，其主要特点是BiAb能同 时结合肿瘤相关抗原和免疫效应细胞上的靶分子，直接触发免疫效应细胞对肿瘤细胞 的特异性杀伤。以下是针对所研究的免疫细胞抗原和肿瘤细胞抗原，以及相关技术发 展的一些背景技术介绍。

1.CD3

CD3分子由4个亚基组成：δ、ε、γ、ζ，其分子质量分别为18.9k Da、23.1k Da、20.5kDa、18.7k Da，其长度分别有171、207、182、164个氨基酸残基。它们一 起组成6条肽链，常与T细胞受体(T cell receptor，TCR)紧密结合形成含有8 条肽链的TCR-CD3复合体，结构示意图见图1。此复合体具有T细胞活化信号转导， 稳定TCR结构的功能。CD3胞质段含免疫受体酪氨酸活化基序(immunoreceptor tyrosine-based activation motif,ITAM)，TCR识别并结合由MHC(major histo-compatibility complex)分子提呈的抗原肽，导致CD3的ITAM的保守序列的酪 氨酸残基被T细胞内的酪氨酸蛋白激酶p56lck磷酸化，然后可募集其他含有SH2(Scr homology 2)结构域的酪氨酸蛋白激酶(如ZAP-70)。ITAM的磷酸化和与ZAP-70的结 合是T细胞活化信号传导过程早期阶段的重要生化反应之一。因此，CD3分子的功能是转导TCR识别抗原所产生的活化信号。

2.CD19

CD19在正常及恶性B淋巴细胞中均有表达，被视为B细胞发育过程中一个涵盖阶段较长的最为可靠的表面标记物。在正常淋巴组织中，CD19表达于生发中心的B细胞 和滤泡树突状细胞、套细胞、滤泡间T细胞区的树突状大细胞，与CD20和CD22染色 模式基本相同，但同CD20相比，CD19在前B细胞中也表达。此外，通过流式细胞学 检测方法，CD19在人体组织分离得到的浆细胞中可以检测到。通常来说CD19在B淋 巴细胞瘤中表达，其中包括B淋巴细胞淋巴瘤、小淋巴细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、 滤泡淋巴瘤、Burkitt淋巴瘤、边缘区淋巴。

3.双特异性抗体技术发展

双特异性抗体，一个抗体分子中的两个抗原结合部位可分别结合两种不同的抗原表位的抗体。

抗体药物是以细胞工程技术和基因工程技术为主体的抗体工程技术制备的生物大 分子药物，具有特异性高、性质均一、可针对特定靶点定向制备等优点。单克隆抗体 在临床上主要应用于以下三个方面：肿瘤治疗、免疫性疾病治疗以及抗感染治疗。其 中肿瘤的治疗是目前单抗应用最为广泛的领域，目前已经进入临床试验和上市的单抗 产品中，用于肿瘤治疗的产品数量占比大概为50％。单克隆抗体治疗肿瘤是一种针对 病变细胞特异靶点刺激免疫系统来杀伤靶细胞的免疫疗法，为了增强抗体的效应功能， 特别是杀伤肿瘤细胞的效果，人们尝试多种方法改造抗体分子，双特异性抗体是改善 抗体治疗效果的发展方向之一，现已成为抗体工程研究领域的热点。

用于免疫治疗的双特异性抗体是含有2种特异性抗原结合位点的人工抗体，能在靶细胞和功能分子(细胞)之间架起桥梁，激发具有导向性的免疫反应，在肿瘤的免疫 治疗中具有广阔的应用前景。