[发明专利]分离的鲤抗病毒天然免疫蛋白TRIM32及抗病毒活性

说明书

技术领域

本发明属于淡水鱼类基因工程技术领域，具体涉及一种分离的鲤抗病毒天然免疫蛋白TRIM32及抗病毒活性。

背景技术

鲤春病毒血症，是由鲤春病毒血症病毒(SVCV)引起的一种重要水生动物疾病，属于国际兽疫局(OIE)规定必须申报的动物疫病。在我国，农业部也将之列为二类动物疫病。SVCV是一种弹状病毒。现被列为弹状病毒科、水泡口炎病属的暂定成员。该病毒感染有很高的死亡率，造成巨大的经济损失。鱼苗一旦感染此病，表现为游动缓慢，兴奋度变低，停留在池塘底部或聚集在水中，反应迟钝并直至死亡。病鱼在外观上主要表现为体内出血、腹膜炎、内脏出血斑点。同时，SVCV能感染青鱼、草鱼、链鱼、鳙鱼和其他几种鲤科鱼。因此，SVC一直是国际上高度关注的一种鱼类病毒性传染病。我国目前没有大规模爆发该病的报道。但已有文献报道我国已从未出现任何症状的鲤鱼、金鱼等观赏性鱼中分离鉴定出SVCV。这对我国观赏鱼类的出口造成了极为严重的影响。因此，加强SVCV的抗病毒研究，寻求有效的预防和治疗方法是当务之急。

天然免疫，即固有免疫或先天性免疫，是机体与生俱来的能够抵御微生物或外来异物侵袭的生理机能，是机体自身防御的第一道防线，具有快速反应性、非特异性、普遍性、多样性等特点。在抗病毒天然免疫中，泛素化扮演着至关重要的角色。

泛素是一种存在于真核细胞中的高度保守的小分子蛋白质，其表达十分广泛。全长有76个氨基酸，分子量为8kD。泛素能够在一系列酶的催化下以共价键结合形式连接到靶蛋白上，完成对靶蛋白的泛素化修饰。这种蛋白翻译后修饰形式可以影响各种不同蛋白分子的定位、表达水平及活性等，从而广泛参与机体生命活动的各个方面，比如细胞周期、分化、调亡、转移、信号传递、炎症反应和基因转录等。泛素化过程主要由三种泛素相关蛋白酶完成，它们分别是E1泛素激活酶、E2泛素结合酶和E3泛素连接酶。而近年来，发现了一种新的与泛素化有关的蛋白家族-TRIM家族。

TRIM(Tripartite motif)家族的名称是由于其具有3个保守的结构域而得来。这三个结构域从N端到C端的顺序依次是RING结构域(RING domain)、1个或2个B-box结构域、一个卷曲螺旋结构域(Coiled-coil domain)，此外该家族还具有一个可变的C末端，因此TRIM家族也称为RBCC家族。RING结构域为锌指结构域，具有E3泛素连接酶活性，介导蛋白自身或不同底物的泛素化。另外参与蛋白间相互作用，并与抗病毒活性相关。B-box结构域也与锌原子结合，在TRIM蛋白中普遍存在，可能与E3泛素连接酶活性有关。卷曲螺旋结构域参与蛋白间同源或异源寡聚作用；而羧基端的SPRY结构域在TRIM蛋白发挥多种生物学功能中起着重要作用。自从1991年TRIM(RBCC)蛋白家族第一个成员XNF7被克隆鉴定后，目前人类基因组已发现和鉴定了近70个TRIM蛋白成员，在鱼类中就有100多种。并且其家族成员的功能越来越受到重视。研究表明TRIM家族的成员参与了细胞分化、增殖、发育、凋亡等许多重要的生物学过程。最近的研究表明部分TRIM蛋白具有抗病毒功能，尤其是对逆转录病毒具有限制作用，并且参与了与天然免疫相关一系列生物过程。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的缺陷，提供一种鲤抗病毒天然免疫蛋白(TRIM32)，同时研究该免疫蛋白(TRIM32)在鲤抗病毒活性中的应用。

本发明通过克隆技术在鲤中分离得到一种鲤抗病毒天然免疫蛋白TRIM32基因，其核苷酸序列是SEQ ID NO:1中第1-1986bp所示的序列。

申请人同时得到该分离的鲤抗病毒天然免疫蛋白TRIM32，其编码的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

试验表明本发明克隆的TRIM32蛋白的表达可以影响鲤春病毒血症病毒(SVCV)的增殖，且TRIM32蛋白在SVCV的生活周期中发挥着重要作用。本发明的基因或蛋白为制备抗SVCV药物的研究提供了新的靶点。

更详细的技术方案和发明效果参见《具体实施方式》所述。

附图说明

序列表SEQ ID NO：1是鲤抗病毒天然免疫蛋白TRIM32基因的核苷酸序列(1-1986bp)，序列全长为1986bp,其中第1-1986bp也是该基因编码区(CDS),显示对应的氨基酸序列。

序列表SEQ ID NO：2是鲤抗病毒天然免疫蛋白TRIM32基因编码的蛋白质序列。