[发明专利]辣根过氧化物酶标记抗体的稀释保护剂及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及诊断生物制品领域，尤其涉及辣根过氧化物酶标记抗体的稀释保护剂及其制备方法。

背景技术

辣根过氧化物酶是一种糖蛋白，因辣根中该酶的含量最高而得名，该酶具有比活性高、稳定、分子量小、纯酶容易制备等优点，因此被广泛地用于临床检验中，特别是以该酶为基础的免疫酶技术在免疫学检测方面应用更加广泛。在各种人类及动物疾病的体外快速诊断方法特别是ELISA商品化检测试剂盒中，酶标抗体特别是辣根过氧化物酶标抗体应用十分广泛。

酶标抗体一般只能将其原液在-20℃以及更低温度条件下贮藏时，且不能经过反复冻融，其免疫活性才能在贮藏一年时间内不会大量地降低，才能有效地保证诊断方法结果的可靠性。目前经过酶标抗体技术的不断发展，酶标免疫活性得到大大的提升，同时为了确保酶标免疫活性的稳定，市售的酶标抗体都是制备成高纯度的浓缩液或冻干粉。市售的酶标抗体在使用时均需进行几千倍的大体积稀释才能进行使用。但是如果将酶标抗体放置于4℃条件下或将酶标抗体进行大体积稀释后，在很短的时间内其免疫活性将迅速下降。对于ELISA商品化试剂盒而言，其关键技术之一是确保试剂盒内的酶标抗体的免疫活性不发生改变，这不仅要求将酶标抗体稀释几千倍制备成工作液，还需在2～8℃甚至在常温条件下进行保存及运输，一种可以有效保护工作浓度的酶标抗体在2～8℃或常温条件下长期保存时效价不会发生改变的稀释剂就显得尤为重要。

发明内容

针对上述技术问题，本发明提供一种辣根过氧化物酶标记抗体的稀释保护剂，使得ELISA商品化试剂盒中工作浓度的辣根过氧化物酶标记抗体在2～8℃或常温条件下免疫活性不发生改变。

具体技术方案为，辣根过氧化物酶标记抗体的稀释保护剂，通过以下方法制得：

(1)每800ml去离子水中溶解8gNaCl、1.44gNa₂HPO₄、0.2gKCl、0.2gKH₂PO₄，充分溶解后，每份溶液加去离子水定容至1000ml，配制成PBS缓冲液；

(2)以1000ml的PBS缓冲液为一份，每份PBS缓冲液中加入0.5～5ml的Tween-20，混合均匀后置于121℃、1bar进行灭菌处理，制备得到灭菌PBST缓冲溶液；

(3))以1000ml的灭菌PBST缓冲溶液为一份，每份灭菌PBST缓冲溶液中加入5～50gBSA和1～10g的明胶，充分溶解；

(4)向步骤(3)制备的每份溶液中加入0.5～5ml的液体防腐剂，用0.22μm的滤膜进行过滤除菌，得到辣根过氧化物酶标记抗体的稀释保护剂。

本发明提供的辣根过氧化物酶标记抗体的稀释保护剂，含有复合型保护剂BSA和明胶，两种保护剂相互补充，可有效防止酶标抗体活性降低。用该稀释保护剂对辣根过氧化物酶标记的抗体进行稀释后，稀释后的酶标抗体可在2～8℃保存12个月其免疫活性基本不发生改变，常温15～25℃保存1个月其免疫活性基本不发生改变。

具体实施方式

结合实施例说明本发明的具体实施方式。

实施例1

辣根过氧化物酶标记抗体的稀释保护剂，通过以下方法制得：

(1)800ml去离子水中溶解8gNaCl、1.44gNa₂HPO₄、0.2gKCl、0.2gKH₂PO₄，充分溶解后，每份溶液加去离子水定容至1000ml，配制成PBS缓冲液；

(2)1000ml的PBS缓冲液中加入3ml的Tween-20，混合均匀后置于121℃、15PSI进行灭菌处理，制备得到灭菌PBST缓冲溶液；

(3)1000ml的灭菌PBST缓冲溶液中加入30gBSA和5g的明胶，充分溶解；

(4)向步骤(3)制备的溶液中加入3ml的液体防腐剂，用0.22μm的滤膜进行过滤除菌，得到辣根过氧化物酶标记抗体的稀释保护剂。

实施例2

辣根过氧化物酶标记抗体的稀释保护剂，通过以下方法制得：

(1)800ml去离子水中溶解8gNaCl、1.44gNa₂HPO₄、0.2gKCl、0.2gKH₂PO₄，充分溶解后，每份溶液加去离子水定容至1000ml，配制成PBS缓冲液；