[发明专利]一种高效生产具有免疫活性的胞外多糖的南极海冰菌

权利要求书

1.一种假交替单胞菌，其特征在于，所述的假交替单胞菌（Pseudoalteromonas sp.）的保藏编号为CGMCC No.10239。

2.权利要求1所述的假交替单胞菌在发酵制备胞外多糖中的应用。

3.一种使用权利要求1所述的假交替单胞菌发酵制备胞外多糖的方法，其特征在于，所述的方法包括有如下的步骤：

1）种子液制备：

将菌株接种入培养基后培养获得种子液，其中培养基的组成如下：蔗糖2.25 %，豆粉1.05%，K₂HPO₄ 0.02%，Na₂SO₄ 0.01%，FeS0₄ ·7H₂O 0.001%，CaCO₃ 0.2 %， pH值7.2，l2l℃灭菌20min；培养条件如下：10℃、120rpm，培养48h；

2）深层发酵制备胞外多糖发酵液

按种子液按照5%的比例接入到发酵培养基中，发酵温度为25±1℃；搅拌速度250r/min，用灭菌豆油作为消泡剂来消除在搅拌过程中产生的气泡；

其中发酵培养基的一种具体组成如下：蔗糖4.5 %，豆粉2.1 %，K₂HPO₄ 0.02%，Na₂SO₄0.01%，FeS0₄ ·7H₂O 0.001%，CaCO₃ 0.2 %；

3)胞外多糖发酵液的后处理

将发酵液以10 000r/min转速离心10min去菌体，将去菌体发酵液加入三倍体积的95％乙醇沉淀过夜后，以5 000r/min 离心收集沉淀；采用TCA法脱蛋白，假交替单胞菌的胞外多糖溶液中加入1.5倍体积的10%TCA溶液，混合均匀，于冰箱中静置4～6h，再以5 000r/min的转速离心15min，除去沉淀，保留上清液，如此反复处理数次，得多糖粗品；多糖粗品复溶，经过凝胶过滤层析和离子交换层析的方法进行纯化，冷冻干燥，得到多糖纯品。