[发明专利]氨苄青霉噻唑酸检测试剂盒和检测方法

说明书

技术领域

本发明属于酶联免疫试剂盒领域，具体涉及一种氨苄青霉噻唑酸检测试剂盒和检测方法。

背景技术

青霉素类抗生素具有杀菌活性强、毒副作用小等特点，在动物饲养中应用非常广泛，主要用于治疗动物疾病，部分产品同时具有促进动物生长的作用。然而，动物性食品中残留的抗生素进入人体后，具有一定的危害作用。一般来说，动物性食品中残留的抗生素对人并不表现为急性毒性作用。人们长期摄入低剂量残留抗生素的食品，随着时间的推移，人体内残留的抗生素逐渐蓄积，从而引起各种慢性毒性作用。某些过敏体质的人在接触残留的抗生素后也可引起过敏(变态)反应。动物性食品中的抗生素残留对人体健康的影响广泛，会造成人体胃肠道菌群失调，导致机会性感染的可能性增加，还可表现为过敏、毒性作用、细菌耐药性、致畸、致突变和致癌作用等多个方面。

氨苄青霉素为β-内酰胺类药物，其结构中的β-内酰胺环不稳定，在碱性环境及β-内酰胺酶存在的情况下易发生断裂，生成氨苄青霉噻唑酸，不易被相应氨苄青霉素抗体检出。而用其他检测方法，如薄层色谱法(TLC)和高效液相色谱法(HPLC)检测时，检测结果易受流动相pH值、温度和其他因素的影响而开环，导致TLC和HPLC方法的稳定性和重现性不好，回收率不高。

发明内容

为了解决现有技术存在的上述问题，本发明提供了一种氨苄青霉噻唑酸检测试剂盒和检测方法，具有快速高效、灵敏度高、重现性好的特点。

本发明所采用的技术方案为：

一种杂交瘤细胞株，其保藏编号为CGMCC NO.10112，保藏日期为2014年12月5日，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

一种由杂交瘤细胞株分泌的氨苄青霉噻唑酸单克隆抗体。

氨苄青霉噻唑酸单克隆抗体在制备检测氨苄青霉噻唑酸的试剂盒方面的应用。

一种用于检测氨苄青霉噻唑酸的试剂盒，包括酶标板、封闭液、氨苄青霉噻唑酸标准品、抗体工作液、酶标记抗体、显色液及终止液；所述抗体工作液为所述杂交瘤细胞株分泌的氨苄青霉噻唑酸单克隆抗体的稀释液。

一种用于检测氨苄青霉噻唑酸的试剂盒，还包括样品稀释液和浓缩洗涤液，所述样品稀释液为pH6.5-8.5的磷酸盐缓冲液，所述浓缩洗涤液为样品稀释液与吐温20的混合液。

一种氨苄青霉噻唑酸试剂盒在检测动物性食品中的应用。

本发明的有益效果为：采用特异性的氨苄青霉噻唑酸单克隆抗体，定量检测青霉素类药物及其代谢产物在动物性食品中的残留；检测结果快速、准确度高、重现性好、检测灵敏度高。

附图说明

图1是本发明进行精密度实验的实验数据。

具体实施方式

本实验采用氨苄青霉噻唑酸偶联蛋白作为免疫原，从而获得氨苄青霉噻唑酸特异性抗体。氨苄青霉素结构如(式1)所示，青霉素代谢产物青霉噻唑酸的结构如(式2)所示，氨苄青霉噻唑酸结构式为(式3)所示。

式1氨苄青霉素结构式

式2青霉噻唑酸结构式

式3氨苄青霉噻唑酸结构式

下面通过具体的实施例对本发明进行进一步的说明。

实施例1杂交瘤细胞株和单克隆抗体的制备

采用碳化二亚胺法，将氨苄青霉噻唑酸与匙孔嘁血蓝蛋白(mcKLH)进行偶联，合成免疫原。对5只6周龄的Balb/c小鼠进行免疫，共进行6次常规免疫及一次加强免疫，剂量为100μg/只，免疫时间间隔为2周，加强免疫的时间为第六次常规免疫后的三天。免疫结束后，获得小鼠的免疫脾细胞。骨髓瘤细胞取用SP2/0细胞，因为其在HAT选择性培养基中不能生长，且本身不能合成免疫球蛋白，因此用它进行细胞融合所获得的杂交瘤细胞只分泌均一的、完全来自于脾细胞的抗体分子，是较理想的可供融合的骨髓瘤细胞，并且具有容易培养、融合率高等优点。应用细胞融合技术建立杂交瘤细胞，采用间接ELISA法筛选出能够稳定分泌氨苄青霉噻唑酸单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞株，进行传代、冻存。