[发明专利]猪初生重性状相关PLAC1基因分子标记的克隆及应用

权利要求书

1.一种与猪初生重相关性状检测的分子标记，其特征在于，该分子标记的核苷酸序列如下所示：

CTGCTACGACGTGTTCACCTTGTCTCAGGCCGGCCGAAGGCCCACCTGCCACTGTCCGCCCTATGTCTTCAGRGCAGGCGGGCGTACTTAGCCCTGCGGGCCCAGGCGGGGGCTCGGGAGGGCCACCTGTGCAGTAGTCTTCCTTCCTTTATACTTCTGACGATGAATCTCTTCTCTCGGGTGATCTGGCTGAGTCCAGGGATCCCCGGGCTTGGGGGGCTCCTGTACTTGCCCTTTCTGAAATTGGTATATACTAGGGACTAATCCGTGCTCTTGTGGCCCTCTTATGGGTAGCCTGTGCT

上述序列中的R是C或T，导致HhaI-RFLP多态性。

2.一种检测如权利要求1所述分子标记的引物对，其DNA序列如下所示：

正向引物：CTGCTACGACGTGTTCACCTT，

反向引物：AGCACAGGCTACCCATAAGAG。

3.一种分子标记在猪初生重性状关联分析中的应用，其特征包括：

1)用人PLAC1基因cDNA为信息探针，作同源序列筛选，获得同源性高的表达序列标签(EST)，然后对EST进行拼接；提取猪妊娠95天胎盘组织总RNA并做cDNA第一链反转录；设计引物对，该引物对的正向引物为TCCTCTTCCGCCAATCCC，反向引物为GCCATCAGAAATTTATTTTCTCTC，用RT-PCR方法扩增猪PLAC1基因的cDNA片段，PCR产物纯化克隆和测序，通过序列分析获得如SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列；

2)根据SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列设计引物对，该引物对的核苷酸序列如下所示：正向引物：CTGCTACGACGTGTTCACCTT，反向引物：AGCACAGGCTACCCATAAGAG，扩增猪基因组DNA，将PCR产物纯化克隆和测序，通过序列分析获得如下所述的核苷酸序列：

CTGCTACGACGTGTTCACCTTGTCTCAGGCCGGCCGAAGGCCCACCTGCCACTGTCCGCCCTATGTCTTCAGRGCAGGCGGGCGTACTTAGCCCTGCGGGCCCAGGCGGGGGCTCGGGAGGGCCACCTGTGCAGTAGTCTTCCTTCCTTTATACTTCTGACGATGAATCTCTTCTCTCGGGTGATCTGGCTGAGTCCAGGGATCCCCGGGCTTGGGGGGCTCCTGTACTTGCCCTTTCTGAAATTGGTATATACTAGGGACTAATCCGTGCTCTTGTGGCCCTCTTATGGGTAGCCTGTGCT

上述序列中的R是C或T，导致HhaI-RFLP多态性；

3)检测目的基因PLAC1 mRNA在猪胎盘的绒毛膜组织样中转录水平的表达，设计用于检测目的基因PLAC1 mRNA表达水平的引物对以及作为内参基因GAPDH的引物对，其核苷酸序列分别如下所示：

扩增目的基因PLAC1的引物对如下：

正向引物：GAAACCTCCACCAGACAGC，

反向引物：CCGTGACCATGAGCCAGT 3；

扩增内参基因GAPDH的引物对如下：

正向引物：CACCAGGGCTGCTTTTAACTCTG，

反向引物：GATGACAAGCTTCCCGTTCTCC 3；

4)对PLAC1基因的组织表达谱进行分析；

5)定位PLAC1基因的mRNA在猪胎盘组织的表达位置；

6)应用PCR-RFLP方法对序列表SEQ ID NO：1的第73位碱基进行检测，然后进行基因型与猪初生重性状的关联分析。

4.权利要求2所述引物对在猪初生重分子标记辅助选择中的应用。