[发明专利]一种采用琼脂糖基质筛选或鉴定抗除草剂水稻的方法

说明书

技术领域

本发明属于农作物培育领域，涉及一种采用琼脂糖基质筛选或鉴定抗除草剂水稻的方法。

背景技术

水稻是我国乃至世界的主要粮食作物之一，每年种植面积约为3000万公顷，产量达2亿吨。在水稻的生产过程中，杂草与水稻争夺资源，不仅降低稻谷产量，还影响稻米的品质。为控制杂草生长，每年需投入大量的人力物力。随着城市化进程的加快，农村劳动力的大量转移，传统的生产作业方式将逐渐消失，水稻生产将面临劳动力短缺的问题。因此，发展高效低耗的新型栽培模式，如水稻直播、抛栽是未来的发展方向。但由于直播、抛栽使杂草控制难度加大，而传统手工除草的方式不再适应新的播种模式。随着科学技术的发展,通过化学方法来控制杂草已成为现代农业中不可缺少的一部分，化学除草剂具有省工省力、高效的特点。在欧美等发达国家，杂草治理主要依靠化学除草剂。因此通过培育抗除草剂水稻新品种是解决水稻生产问题的理想途径。另一方面，利用除草剂抗性基因也可以有效的解决常规稻及两系杂交水稻制种中的纯度问题，并且能简化杂交制种程序，实现机械化制种，降低杂交种成本。

然而目前水稻除草剂的抗性筛选或鉴定主要是依靠田间试验进行，即在田间对水稻进行播种，一定时期后进行除草剂的喷施。此方法费时费力，而且喷施的浓度及均匀度不易控制，从而影响了结果的准确性。而采用分子标记的方法成本较高，且技术环节多，对设备也有一定的要求；对已知基因有效，而对未知基因的筛选及鉴定就无法应用。因此一种快速高效准确的抗除草剂筛选或鉴定方法就显得尤为重要。

发明内容                                           

本发明公开了一种采用琼脂糖基质筛选或鉴定抗除草剂水稻的方法，它是按如下的步骤进行：

（1）浸种催芽：

将100-105粒水稻种子装在纸袋中，做好标记，浸泡在32-34℃的温水中，连同盛放容器置于光照培养箱中32℃保温，每天早中晚换水三次，待3-4天露白后方可播种；所述的种子指的是：将咪唑乙烟酸抗性的水稻品种与咪唑乙烟酸非抗性水稻品种杂交，收获得到F1代种子；播种F1代种子，育苗，移栽，混收F1代植株上的F2种子；单株种植F2代且按株收获F3代种子，获得到所述的水稻种子；或将咪唑乙烟酸敏感的水稻品种种子进行诱变处理，得到M1代种子；播种M1代种子，按常规育苗、移栽和种植，培育成M1植株，成熟后收获得到M2代种子，即为所述的水稻种子；

（2）培养基准备：

1）配制除草剂母液：将除草剂普施特稀释十倍，即2ml的普施特加水18ml；

2）配制0.4-0.6%(w/w)的琼脂糖平板：将2L水倒入电磁锅中，加入10g琼脂糖，搅拌均匀，煮沸直至琼脂完全溶解，待温度降低到60-70℃后分装到三角瓶中，每瓶500ml，加入500ul稀释10倍的除草剂咪唑乙烟酸母液，即终浓度为0.1ml/L，摇匀后倒平皿，培养基凝固后即可使用；

（3）播种：

在培养皿上标记所播品系名称，选取露白的种子50-55粒，均匀的播种在培养基上，同时播种抗和不抗的品种各两粒作为正负对照，并划线分隔做好标记，为防止水分散失，将10-12个的培养皿叠到一起并用保鲜膜包裹，最后放到32℃连续光照的培养箱中；

（4）观察统计

待3-4天后进行观察统计，与抗和不抗的正负对照品种进行比较，统计出抗除草剂的种子数与不抗除草剂的种子数。

本发明选择的抗性对照品种指的是：具有抗性基因不能被除草剂杀死（不敏感）的品种。本实验用：歼1。

本发明选择的不抗对照品种指的是：没有抗性基因能被除草剂杀死（敏感）的品种。本实验用：日本晴。

本发明所述的种子，典型的待测水稻种子可以通过诱变育种或杂交育种两种方法得到：

采用诱变育种时，所述的水稻种子可以通过如下方法培育：将咪唑乙烟酸敏感的水稻品种种子进行诱变处理，得到M1代种子；播种M1代种子，按常规育苗、移栽和种植，培育成M1代植株，成熟后收获得到M2 代种子，即为所述的水稻种子。