[发明专利]一种登革热病毒荧光PCR 检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明提供一种登革热病毒荧光PCR检测试剂盒，具体是一种登革热病毒通用型荧光PCR检测试剂盒。

背景技术

登革热(Dengue fever，DF)是由1～4型登革热病毒(Dengue fever virus,DENV)引起、经伊蚊传播的急性传染病，按照《中华人民共和国传染病防治法》的规定其为乙类传染病。登革热临床表现复杂多样，具有传播迅猛、发病率高及严重类型(登革出血热、登革休克综合征)病死率较高、人群普遍易感等特点，加上登革热的输入性、突发性，易致误诊、漏诊，造成传染源“逍遥”传播，而致疫情报告、调查处理不及时从而造成疫情蔓延。亚洲、大洋洲、美洲和非洲均有本病发生，是热带、亚热带地区的一个非常严重的公共卫生问题。早发现、早隔离、早就地治疗是登革热病毒临床诊疗的关键。关于登革热病毒的详细情况如下：

(一)病原学

登革热病毒为黄病毒科(F1aviviridae)黄病毒属(F1avivirus)，共有四种血清型(DENV-1,DENV-2,DENV-3和DENV-4)和多种生物型。成熟的病毒颗粒核心直径约30nm，由单股正链RNA与壳蛋白C构成，外包一层厚约10nm的脂质包膜，包含膜蛋白E和膜蛋白M。RNA有一个开放性阅读框架，约含11000个核苷酸序列，编码3种结构蛋白和7种非结构蛋白。结构蛋白包括核壳蛋白C，包膜蛋白E和M。包膜蛋白E诱导生成血凝抑制抗体，中和抗体和保护性抗体。抗E的抗体具有抗体依赖感染增强作用。最外层为两种糖蛋白组成的包膜，包膜含有型和群特异性抗原，用中和试验可鉴定其型别。登革病毒结构与其它黄病毒相近，4个血清型可与其他B组虫媒病毒如乙型脑炎病毒可交叉免疫反应。

登革病毒不耐热，60度30min，100度2min均可使之灭活，但可耐低温及干燥，对寒冷的低抗力强，在人血清中贮存于普通冰箱可保持传染性数周，-70℃可存活8年之久；不耐酸、不耐醚。用乙醚、紫外线或0.05％福尔马林可以灭活。

(二)流行病学特征

传染源：患者和隐性感染者为主要传染源，未发现健康带病毒者。患者在发病前6～8小时至病程第6天，具有明显的病毒血症，可使叮咬伊蚊受感染。流行期间，轻型患者数量为典型患者的10倍，隐性感染者为人群的1/3，可能是重要传染源，丛林山区的猴子和城市中某些家畜虽然有感染登革病毒的血清学证据，但作为传染源，尚未能确定。

传播媒介：已知有12种伊蚊可传播本病，但最主要的是埃及伊蚊和白纹伊蚊。在不同地区中不同蚊种所起的作用不一样，如在太平洋岛国及我国的广东、广西，白纹伊蚊是主要传播媒介，而雷州半岛、广西沿海、海南省和东南亚地区以埃及伊蚊传播为主。伊蚊只要与有传染性的液体接触一次，即可获得感染，病毒在蚊体内复制8～14天后即具有传染性，传染期长者可达174日。具有传染性的伊蚊叮咬人体时，即可将病毒传播给人。因在捕获伊蚊的卵巢中检出登革病毒颗粒，推测伊蚊可能是病毒的储存宿主。

易感人群：在新疫区各年龄均普遍易感，但青壮年的临床表现较明显。1980年在广东流行中，最小年龄3个月，最大86岁，但以青壮年发病率最高。在地方性流行区，20岁以上的居民，100％在血清中能检出抗登革热病毒的中和抗体，因而发病者多为儿童。

目前确认有四种型别的登革热病毒，由于对不同型别毒株感染无交叉免疫力，因此可以发生二次感染。感染一种病毒型产生的免疫对同型病毒免疫力可持续1～4年，而对异型病毒的免疫则短暂且不可靠。

流行特性：一是地方性；凡有伊蚊孳生的自然条件及人口密度高的地区，均可发生地方性流行，在城市中流行一段时间之后，可逐渐向周围的城镇及农村传播，在同一地区，城镇的发病率高于农村。二是季节性；发病季节与伊蚊密度、雨量相关。在气温高而潮湿的热带地区，蚊媒常年繁殖，全年均可发病。我国广东、广西为5～10月，海南省3～10月。三是突然性；流行多突然发生，不少国家在本病消慝十余年之后突然发生流行，我国40年代在东南沿海曾有散发流行，至1978年在广东佛山突然流行。四是传播迅速，发病率高，病死率低，疫情常由一地向四周蔓延。如1978年5月广东省佛山市石湾镇首先发生登革热，迅速波及几个市、县。1980年3月海南省开始流行，很快席卷全岛，波及广东内陆几十个省、市。病死率0.016％～0.13％。本病可通过现代化交通工具远距离传播，故多发生在交通沿线及对外开放的城镇。

(三)临床表现