[发明专利]一种汗腺分化诱导培养基及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及细胞生物学领域，具体而言，涉及一种汗腺分化诱导培养基及其应用。

背景技术

目前对于诱导人骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)和/或脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)向汗腺细胞分化可以采用与热休克汗腺细胞共培养或培养于含热休克汗腺培养基的上清液的方法获得具有汗腺细胞表型特征的BM-MSCs和/或hUC-MSCs。而采用以上方法获得汗腺样细胞(SGCs)一般需要从供体获得正常汗腺组织(sweat glands,SGs)，继而采用相应的诱导方式获取SGCs。而对于以上汗腺诱导方法，一方面需要等待获取正常的SGs，另一方面对于诱导MSCs向SGCs分化的关键调控基因不明确，因此无法配制成品化的汗腺分化诱导培养基，上述诱导方法受到SGs来源的限制而无法广泛开展。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种汗腺分化诱导培养基，以重组人角化细胞生长因子(rhKGF)作为关键调控因子，在原有汗腺细胞培养基的基础上构建出成品化的汗腺分化诱导培养基，可广泛用于多种MSCs向汗腺细胞分化诱导的相关研究及临床应用。

本发明的第二目的在于提供一种所述的汗腺分化诱导培养基在诱导人脐带间充质干细胞向汗腺样细胞分化中的应用，所述的汗腺分化诱导培养基能够诱导人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)向汗腺样细胞(SGCs)分化，得到汗腺样细胞，以解决背景技术中的不足。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

一种汗腺分化诱导培养基，其特征在于，在低糖DMEM培养基中添加以下成分：以低糖DMEM培养基的体积计，胎牛血清的体积分数为8-15％，半琥珀酰氢化可的松0.3-0.5μg/ml，rh-KGF 10-100ng/ml，三碘甲状腺原氨酸1-3nmol/ml，rh-EGF 10-100ng/ml，胰岛素-转铁蛋白-亚硒酸钠溶液0.05-0.2ml/ml；

其中，所述胰岛素-转铁蛋白-亚硒酸钠溶液包含以下成分：胰岛素0.01g/L，人转运铁蛋白0.0055g/L，亚硒酸0.000006g/L。

本发明提供的汗腺分化诱导培养基，以重组人角化细胞生长因子(rhKGF)作为关键调控因子，在原有汗腺细胞培养基的基础上构建出的成品化的汗腺分化诱导培养基，该汗腺分化诱导培养基能够诱导人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)向汗腺样细胞(SGCs)分化，得到汗腺样细胞，结果稳定可靠，可广泛用于多种MSCs向汗腺细胞分化诱导的相关研究及临床应用。

为了使达到更好的培养效果，优选地，胎牛血清为特级胎牛血清。

为了使汗腺分化诱导培养基更好的发挥诱导作用，以获得性状更明显的汗腺样细胞，优选地，以低糖DMEM培养基的体积计，rh-KGF 20-100ng/ml。

进一步地，以低糖DMEM培养基的体积计，rh-KGF 40-100ng/ml。

更进一步地，以低糖DMEM培养基的体积计，rh-KGF 40ng/ml。

为了增强各成分之间的协同配合作用，以得到更好表达的汗腺样细胞，优选地，以低糖DMEM培养基的体积计，胎牛血清的体积分数为10％，半琥珀酰氢化可的松0.4μg/ml，三碘甲状腺原氨酸2nmol/ml，rh-EGF 10-50ng/ml，胰岛素-转铁蛋白-亚硒酸钠溶液0.1ml/ml；

其中，所述胰岛素-转铁蛋白-亚硒酸钠溶液包含以下成分：胰岛素0.01g/L，人转运铁蛋白0.0055g/L，亚硒酸0.000006g/L。

更优选地，以低糖DMEM培养基的体积计，rh-EGF 10ng/ml。

此外，为了防止细胞在培养过程中受到污染，优选地，所述汗腺分化诱导培养基还包括：以低糖DMEM培养基的体积计，青霉素90-110U/ml，链霉素90-110μg/ml。

进一步地，以低糖DMEM培养基的体积计，青霉素100U/ml，链霉素100μg/ml。

本发明还提供了所述的汗腺分化诱导培养基在诱导人脐带间充质干细胞向汗腺样细胞分化中的应用。

3-5代的人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)的细胞增殖、分化活性最强，优选地，所述人脐带间充质干细胞采用3-5代细胞。

优选地，细胞诱导的时间为20-25天，优选为21天。该培养天数，人脐带间充质干细胞被诱导向汗腺样细胞分化，得到汗腺样细胞。

为了使诱导过程的顺利进行，进一步地，所述人脐带间充质干细胞以1×10⁴/孔的密度接种进行培养；